【摘要】：多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育齡期婦女常見的內(nèi)分泌紊亂性疾病,發(fā)病率為5%～10%,占不排卵婦女的75%-80%,它是一種高度異質(zhì)性疾病,病理生理特征和臨床表現(xiàn)具有多樣性,發(fā)病機(jī)制至今未明。典型的臨床表現(xiàn)有卵巢多囊性改變、不孕、肥胖、多毛和痤瘡等,并常伴胰島素抵抗和高脂血癥。PCOS病理生理學(xué)改變極為廣泛,涉及遺傳學(xué)、內(nèi)分泌、糖脂代謝、蛋白質(zhì)代謝和卵巢局部調(diào)控因素等異常變化,是目前婦科內(nèi)分泌領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)問題。PCOS患者還易伴有糖尿病、心血管疾病及子宮內(nèi)膜癌等遠(yuǎn)期并發(fā)癥,嚴(yán)重影響了患者的心理健康和生活質(zhì)量,對社會和家庭和諧帶來了負(fù)面影響。 目前該病多以內(nèi)科治療為主,幾乎不采取手術(shù)治療,收集臨床標(biāo)本來研究該病的發(fā)病機(jī)制和治療策略非常困難,因此建立合適的大鼠模型,對PCOS的病因、發(fā)病機(jī)制及診療手段的研究極為重要。 PCOS動物模型的建立方法有多種,大多數(shù)模型具有卵巢多囊狀改變,但這些模型多是模擬PCOS某一或某幾方面的病理特征,有些模型甚至出現(xiàn)與PCOS病理特征不符的現(xiàn)象,使得這些模型無法很好地應(yīng)用于臨床研究。本研究采用來曲唑灌胃法和脫氫表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)皮下注射法建立PCOS大鼠模型,針對PCOS的兩大內(nèi)分泌特征,分別從大鼠體重、卵巢的形態(tài)、卵巢的體積和相對質(zhì)量、卵巢組織學(xué)變化、大鼠動情周期變化、大鼠性激素水平的變化和卵巢中受體蛋白的表達(dá)量等方面對兩種PCOS大鼠模型進(jìn)行評價,為PCOS的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 目的 本研究通過來曲唑灌胃法和DHEA皮下注射法建立PCOS大鼠模型,分別從大鼠體重、卵巢的形態(tài)、卵巢的體積和相對質(zhì)量、卵巢組織學(xué)變化、大鼠動情周期變化、大鼠性激素水平的變化和卵巢中受體蛋白的表達(dá)量等方面對模型進(jìn)行評價,以期為研究PCOS選擇合適的大鼠模型。 材料與方法 1研究對象 選取6周齡和23日齡清潔級雌性SD大鼠各60只,均隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、實(shí)驗(yàn)對照組和空白對照組各20只,分別用于來曲唑造模法和DHEA造模法。 2實(shí)驗(yàn)方法 2.1飼養(yǎng)條件 清潔級飼養(yǎng),環(huán)境溫度為20～24℃,濕度為40%-60%,每天光照10小時,自由飲水,喂以顆粒飼料。2.2來曲唑建模法 實(shí)驗(yàn)組大鼠灌胃服用來曲唑1mg·(kg·d)-1,溶于1%羧甲基纖維素(Carboxy Methylated Cellulose,CMC)中,實(shí)驗(yàn)對照組大鼠灌胃服用1%CMC,均連續(xù)定時灌服20日,空白對照組正常飼養(yǎng)。 2.3 DHEA建模法 實(shí)驗(yàn)組大鼠背部皮下注射DHEA 6mg·(100g·d)-1溶于0.2ml甘油,實(shí)驗(yàn)對照組大鼠背部皮下注射0.2ml甘油,均連續(xù)皮下注射20曰,空白對照組正常飼養(yǎng)。 2.4建模過程觀察指標(biāo) 每日觀察大鼠精神狀態(tài),并對各組大鼠進(jìn)行陰道涂片后行巴氏染色,觀察動情周期；每三日稱量并記錄大鼠體重,繪制大鼠體重增長曲線圖。 2.5標(biāo)本的采集和處理 第21日對所有大鼠稱重后行乙醚麻醉,快速心臟取血法致死(對照組選取在其動情間期)。取血清置-20℃凍存?zhèn)溆?取出雙側(cè)卵巢稱重后用游標(biāo)卡尺測量其長度(A)、寬度(B)和厚度(C)；一側(cè)卵巢置于10%甲醛固定,另一側(cè)卵巢用PBS沖洗后置-80℃凍存?zhèn)溆谩?2.6檢測指標(biāo) 2.6.1卵巢體積和相對質(zhì)量 根據(jù)橢圓形體積計算公式V(mm3)=0.52×A×B×C計算大鼠卵巢體積；根據(jù)卵巢重量和大鼠體重計算卵巢相對質(zhì)量,即質(zhì)量(mg)／體重(g)×10-3。 2.6.2卵巢組織學(xué)檢查 以大鼠卵巢最大平面為待檢平面進(jìn)行石蠟包埋,每個蠟塊以4μm厚度切片兩次,進(jìn)行HE染色。 2.6.3大鼠血清學(xué)檢測 應(yīng)用放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)測定大鼠血清中促黃體生成激素(Luteinizing Hormone,LH)、卵泡刺激素(Follicle Stimulating Hormone,FSH)、雌二醇(Estradiol,E2)、孕酮(Progesterone,P)和睪酮(Testosterone,T)水平。 2.6.4卵巢中受體蛋白檢測 應(yīng)用免疫組化SP法檢測大鼠卵巢中雄激素受體(Androgen receptor, AR)和黃體生成素受體(Luteinizing hormone receptors,LHR)定位表達(dá)；應(yīng)用Western blot法檢測各組大鼠卵巢中AR和LHR相對表達(dá)量。 3統(tǒng)計學(xué)處理 選用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,所有數(shù)據(jù)以x±s表示。計量資料兩均數(shù)差異的比較采用方差齊性檢驗(yàn)和獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),組內(nèi)比較用單因素方差分析和多重比較中的LSD法,以a=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 1大鼠一般情況：各組大鼠建模過程中狀態(tài)良好、反應(yīng)靈敏、體毛潤澤。 2大鼠體重和動情周期的變化：①來曲唑法實(shí)驗(yàn)組大鼠體重增加量明顯高于兩對照組(P0.05)；實(shí)驗(yàn)組大鼠在灌胃12日后全部失去規(guī)律性動情周期,均處于動情間期時相。②DHEA法實(shí)驗(yàn)組大鼠體重增加量和對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；實(shí)驗(yàn)組大鼠動情周期變化極不規(guī)律,至處死之日仍未完全失去規(guī)律性動情周期。③對照組大鼠保持規(guī)律的動情周期。 3卵巢形態(tài)學(xué)、組織學(xué)、體積和相對質(zhì)量變化：①來曲唑法實(shí)驗(yàn)組大鼠卵巢表面蒼白、包膜增厚,可見大量囊狀卵泡形成；組織學(xué)檢查卵巢顆粒細(xì)胞層減至2-3層,間質(zhì)細(xì)胞明顯增生,卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞多數(shù)缺失,少見排卵前卵泡和黃體；實(shí)驗(yàn)組大鼠卵巢體積和相對質(zhì)量明顯大于兩對照組(p0.05)。②DHEA法實(shí)驗(yàn)組大鼠卵巢表面蒼白,囊狀卵泡凸起不明顯；卵巢組織學(xué)檢查可見顆粒細(xì)胞層減少和白膜增厚,但間質(zhì)增生不明顯；實(shí)驗(yàn)組大鼠卵巢體積明顯小于兩對照組(P0.05),三組大鼠卵巢相對質(zhì)量的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。③對照組大鼠卵巢顏色紅潤、表面光滑,顆粒細(xì)胞呈多層,可達(dá)8-9層。 4大鼠性激素水平變化：①來曲唑法實(shí)驗(yàn)組大鼠血清LH、T濃度,LH/FSH顯著高于兩對照組,FSH、P、E2濃度顯著低于兩對照組(P0.05);②DHEA法實(shí)驗(yàn)組大鼠血清T、E2濃度顯著高于兩對照組,血清FSH濃度明顯低于兩對照組(P0.05),實(shí)驗(yàn)組大鼠血清中LH、P水平及LH/FSH與兩對照組差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 5大鼠卵巢中受體蛋白表達(dá)量：①來曲唑法實(shí)驗(yàn)組大鼠卵巢AR、LHR的表達(dá)量均明顯高于兩對照組(P0.05)。②DHEA法實(shí)驗(yàn)組大鼠卵巢的AR表達(dá)量明顯高于兩對照組(P0.05)；三組大鼠卵巢中LHR的表達(dá)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 來曲唑法大鼠模型的病理特征較DHEA法大鼠模型與PCOS特征更為接近。
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【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R-332

【引證文獻(xiàn)】

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1 李瑩;妊娠晚期胎盤中可溶性人類白細(xì)胞抗原G的表達(dá)與重度子癇前期的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2012年

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本文編號：2462548