【摘要】：背景與目的 結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，M.tb）RD2區(qū)編碼抗原：培養(yǎng)濾液蛋白21（Culture filtrate protein21，CFP21）和M.tb主要蛋白64（Major proteinof mycobacterium tuberculosis64，MPT64），僅在M.tb和部分BCG菌株中表達。M.tb RD1區(qū)編碼抗原：培養(yǎng)濾液蛋白10（Culture filtrate protein10，CFP10）和6kDa早期分泌性靶抗原（6kDa Early secretary antigenic target，ESAT-6），存在于M.tb早期培養(yǎng)濾液里，且在全部BCG菌株及絕大部分非結核分枝桿菌（Nontuberculosis mycobacteria，NTM）不表達。HspX是M. tb休眠期或潛伏感染期高表達的蛋白。我們在前期的研究工作中，通過基因工程技術，分別將HspX、或CFP21和MPT64，ESAT6和CFP10構建成CFP21-MPT64（rCM）和ESAT-6-CFP10（rEC）融合蛋白，在大腸桿菌中表達純化。本課題以這三種蛋白為基礎建立診斷M.tb感染的全血IFN-γ釋放試驗（Whole-blood IFN-γ assay，WBIA）并初步評價這種診斷方法的診斷價值，為進一步的臨床試驗奠定基礎。 方法 1. rCM、rEC和rHspX蛋白的純化、定量和鑒定； 2.健康人（Health）、結核桿菌潛伏感染人群（LTBI）和痰涂片陽性結核病患者（SPTB）的篩查和鑒定； 3.全血IFN-γ釋放試驗（WBIA）檢測受檢者血清中IFN-γ的含量，用spss17.0分析軟件進行統(tǒng)計分析，評價rCM-WBIA、rEC-WBIA和rHspX-WBIA單獨和聯(lián)合使用診斷M.tb的價值。 結果 1成功純化rCM、rEC和rHspX蛋白。凍干后，用1mL1×PBS溶解并過濾除菌并將蛋白保存于-20℃待用。純化產物的大小和純度，經SDS-PAGE電泳鑒定符合預期。 2Health選用同濟醫(yī)學院2012級新生，新鄉(xiāng)市和濟寧市結核病防治所共120人，臨床體格檢查正常，胸部X光檢查正常，TST陰性。LTBI選用同濟醫(yī)學院2012級新生，新鄉(xiāng)市和濟寧市結核病防治所共92人，臨床體格檢查正常，胸部X光檢查正常，TST陽性，痰涂片陰性。SPTB選用新鄉(xiāng)市和濟寧市結核病防治所共43人，有明顯臨床癥狀，胸部X光檢查有結核病灶，TST陽性或強陽性，痰涂片陽性。 3rCM分別刺激Health，LTBI和SPTB的全血釋放的IFN-γ含量的Mean±sd分別為117.3±116.8pg/mL，790.7±876.5pg/mL和728.5±672.0pg/mL；SPTB和Health以及LTBI與Health之間有顯著統(tǒng)計學意義（p＜0.001）。rEC分別刺激Health， LTBI和SPTB的全血釋放的IFN-γ含量的Mean±sd分別為119.3±105.0pg/mL，961.3±1112.8pg/mL和1050.9±917.6pg/mL；SPTB和Health以及LTBI與Health之間有顯著統(tǒng)計學意義（p＜0.001）。rHspX分別刺激Health，LTBI和SPTB的全血釋放的IFN-γ含量的Mean±sd分別為25.8±76.7pg/mL，86.5±251.7pg/mL和130.2±208.5pg/mL；LTBI與Health，以及SPTB與Health之間有顯著統(tǒng)計學意義（p＜0.001）。PHA分別刺激Health，LTBI和SPTB的全血釋放的IFN-γ含量的Mean±sd分別為1274.1±1665.0pg/mL，2604.4±1805.7pg/mL和2456.2±2985.8pg/mL；SPTB與Health之間有顯著統(tǒng)計學意義（p＜0.05）。 4rCM-WBIA和rEC-WBIA單獨診斷總人群中的M.tb感染人群（包括SPTB和LTBI）：受試者工作特征（Receiver Operating Characteristic，ROC）曲線下面積（Area under curve，AUC）分別為0.855和0.877，cut-off值分別為393.4pg/mL和352.2pg/mL，靈敏度分別為64.4%和74.8%，特異度分別為100%和98.3%。rCM-WBIA和rEC-WBIA串聯(lián)（兩種方法均為陽性才是陽性）和并聯(lián)（兩種方法之一為陽性即是陽性）診斷總人群中的M.tb感染人群的靈敏度分別為51.1%和87.4%，特異度分別為100%和98.3%。 rCM-WBIA和rEC-WBIA單獨診斷M.tb感染人群中的SPTB的靈敏度分別為62.8%和86.0%，特異度分別為35.9%和30.4%。rCM-WBIA和rEC-WBIA串聯(lián)和并聯(lián)診斷M.tb感染人群中SPTB的靈敏度分別為60.5%和88.4%，特異度分別為53.3%和13.0%。 5rCM-WBIA和rEC-WBIA單獨診斷總人群中的M.tb感染人群一致性極差，符合率為63.7%，κ=0.16。rCM-WBIA和rEC-WBIA單獨診斷M.tb感染人群中的SPTB一致性極差，，符合率為72.1%，κ=0.316。 6rHspX-WBIA診斷M.tb感染人群中的LTBI的cut-off值為54.2pg/ml，靈敏度和特異度分別為23.8%和52.6%。 結論 1診斷總人群中的M.tb感染人群宜選用rCM-WBIA和rEC-WBIA并聯(lián)； 2診斷M.tb感染人群中的SPTB宜選用rCM-WBIA和rEC-WBIA串聯(lián)； 3rHspX-WBIA對診斷M.tb感染人群中的LTBI無診斷價值。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R378.911

【共引文獻】

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本文編號：2460810