【摘要】：鏈球菌為兼性厭氧的革蘭氏染色陽(yáng)性菌,其可引起豬及人類的多種疾病。莢膜多糖有抗吞噬活性,在豬鏈球菌致病過(guò)程中發(fā)揮重要作用,因此,不少學(xué)者正努力探索預(yù)防這些疾病的途徑,以莢膜多糖為基礎(chǔ)的疫苗研制工作正在展開(kāi)。本文對(duì)1型、1/2型和14型豬鏈球菌莢膜多糖進(jìn)行提取分離,通過(guò)多種提取和分離技術(shù)及免疫檢測(cè)手段,獲得了成分較為均一的具有免疫活性的各型莢膜多糖組分T_1、T_(1/2)和T_(14),然后對(duì)各個(gè)組分糖含量、蛋白含量、唾液酸含量、單糖組成、相對(duì)分子質(zhì)量等理化性質(zhì)進(jìn)行分析,并采用多種化學(xué)分析及現(xiàn)代儀器分析技術(shù),初步確定了1/2型和14型豬鏈球菌莢膜多糖化學(xué)結(jié)構(gòu)。 采用不同酶解法和鈣鹽分步沉淀法依次對(duì)靜置培養(yǎng)的1型、1/2型和14型豬鏈球菌菌體進(jìn)行提取,對(duì)提取得到的莢膜粗多糖組分CPS_1、CPS_(1/2)和CPS_(14)分別進(jìn)行了初步的理化性質(zhì)研究。對(duì)CPS_1、CPS_(1/2)和CPS_(14)分別采用Q Sepharose Fast Flow離子交換層析柱和Sepharcryl S-300凝膠滲透層析柱進(jìn)一步純化,其中得到的組分T_1、T_(1/2)和T_(14)經(jīng)斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Dot-ELISA)證明分別為1型、1/2型和14型豬鏈球菌莢膜多糖。經(jīng)測(cè)定莢膜多糖T_1、T_(1/2)和T_(14)相對(duì)分子質(zhì)量分別為262.5 kD、512.7 kD和487.4 kD,糖含量分別為29.3%、96.6%和53.5%,蛋白含量分別為3.1%、4.3%和0.5%,唾液酸含量之比分別為1:2.67:0.19。經(jīng)PMP柱前衍生高效液相色譜法分析,T_1單糖組成摩爾數(shù)比為Gal:GlcN:Glc:Rha: GalN=1:1.46:0.79:2.13:0.27,T_(1/2)單糖組成摩爾數(shù)比為Gal:GlcN:Glc:Rha:GalN=1: 0.63:0.6:0.43:0.56,T_(14)單糖組成摩爾數(shù)比為Gal:GlcN:Glc:Rha=1:0.46:0.34:0.08。在對(duì)各型莢膜多糖組分基本理化性質(zhì)進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上,對(duì)組分T_(1/2)和T_(14)進(jìn)行紅外光譜和核磁共振波譜分析,對(duì)其相應(yīng)脫唾液酸后的產(chǎn)物DT_(1/2)和DT_(14)進(jìn)行核磁共振波譜分析和氣相質(zhì)譜分析,通過(guò)多種化學(xué)分析方法和現(xiàn)代儀器分析技術(shù)對(duì)莢膜多糖T_(1/2)和T_(14)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究。結(jié)果表明,T_(1/2)主要含有→3,4)Gal-(1→,Gal-(1→,→3,4)Rha-(1→,→3)Glc-(1→這四種結(jié)構(gòu)單元,同時(shí)含有少量的→2,3)Rha-(1→,→4)Rha-(1→等分支點(diǎn);T_(14)主要含有Gal-(1→,→3,6)Gal-(1→,→3)Glc-(1→這三種結(jié)構(gòu)單元,同時(shí)含有少量的→2,4)Rha-(1→分支點(diǎn)。另外,本實(shí)驗(yàn)中還得到T_1-1、T_(1/2)-B、T_(14)-B和T_(14)-C多糖組分,并對(duì)其糖含量、蛋白含量、唾液酸含量、單糖組成、相對(duì)分子質(zhì)量等理化性質(zhì)進(jìn)行了研究。 目前對(duì)豬鏈球菌莢膜多糖的研究主要集中在血清2型上,對(duì)其它具有致病性的1型、1/2型和14型豬鏈球菌的研究并不多,特別是對(duì)其分離純化和結(jié)構(gòu)分析方面的研究報(bào)道尚不多見(jiàn)。本文對(duì)1型、1/2型和14型豬鏈球菌莢膜多糖(T_1、T_(1/2)和T_(14))及其相關(guān)無(wú)免疫原性的多糖組分(T_1-B、T_(1/2)-B、T_(14)-B和T_(14)-C)進(jìn)行了初步研究,通過(guò)對(duì)1/2型和14型豬鏈球菌莢膜多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行較為系統(tǒng)的研究,可以為以莢膜多糖為基礎(chǔ)的疫苗研制提供更多的線索和依據(jù),進(jìn)而推動(dòng)未來(lái)多價(jià)疫苗和結(jié)合疫苗的發(fā)展。
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【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 唐家琪,朱進(jìn),郭恒彬,胡曉抒,朱鳳才,劉光中;豬鏈球菌引起人中毒性休克綜合征和腦膜腦炎的流行病學(xué)調(diào)查及病原學(xué)研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年11期

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本文編號(hào)：2452063