【摘要】：目的：探討體外長期培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord-MSCs, hUC-MSCs)生物活性變化特點(diǎn)及分子機(jī)制,為提高M(jìn)SCs體外長期培養(yǎng)的質(zhì)量與穩(wěn)定性提供實(shí)驗(yàn)資料。 方法：無菌收集剖宮產(chǎn)新生兒臍帶,經(jīng)膠原酶Ⅱ消化,分離細(xì)胞。采用粘附生長選擇法體外純化hUC-MSCs,并通過胰酶消化傳代、擴(kuò)增hUC-MSCs。取第3代細(xì)胞進(jìn)行流式分析,脂肪和成骨誘導(dǎo)鑒定；收集不同代的細(xì)胞分別用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)和爬片技術(shù)檢測細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞粘附能力。利用熒光定量PCR對不同代細(xì)胞的IL-6、IL-11、PCNA、Galectin-3等基因表達(dá)情況進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測,同時用Westernblot免疫印記分析Galectin-3蛋白的表達(dá),ELISA法檢測IL-6、IL-11分泌情況。 結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)分離制備的細(xì)胞表型為CD105+/CD29+/CD44+/CD31-/CD34-/CD45-/HLA-DR-,可誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞是典型的hUC-MSCs。傳代培養(yǎng)第3至23代細(xì)胞形態(tài)無明顯變化,細(xì)胞的生長曲線基本一致,第28代后細(xì)胞增長緩慢。第33代細(xì)胞較第3代細(xì)胞G0/G1減少17.9%、S+G2/M增加103.4%、細(xì)胞凋亡率增加316.7%,差異均有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；第3至第18代細(xì)胞間G0/G1、S+G2/M、細(xì)胞凋亡率和粘附細(xì)胞數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。第33代的IL-6、IL-11、PCNA基因表達(dá)相對量分別是第3代的0.44,0.63,0.67倍,差異均有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；第33代的Galectin-3基因表達(dá)相對量是第3代的0.97倍,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。第33代細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-6、IL-11較第3代分別減少了50.2%和59.3%,而Galectin-3無明顯差異。 結(jié)論：在體外長期培養(yǎng)環(huán)境中,隨著傳代次數(shù)的遞增,(?)UC-MSCs的增殖及粘附能力下降,細(xì)胞凋亡率增加,產(chǎn)生IL-6和IL-11的能力逐漸減弱,而Galectin-3的生成無明顯改變,總的生物活性呈逐漸下降趨勢,其最佳生物活性期出現(xiàn)在培養(yǎng)第3至18代之間。
[Abstract]:Aim: to investigate the biological activity changes and molecular mechanisms of human umbilical cord mesenchymal stem cells (human umbilical cord-MSCs, hUC-MSCs) cultured in vitro in order to provide experimental data for improving the quality and stability of long-term culture of human umbilical cord mesenchymal stem cells (MSCs) in vitro. Methods: the umbilical cord of caesarean section newborn was collected aseptically and digested by collagenase 鈪，

本文編號：2443876