【摘要】：目的 為尋找新的血吸蟲病免疫診斷候選抗原分子,對(duì)基于蛋白質(zhì)組技術(shù)篩選出的日本血吸蟲鳥氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(SjOAT)和親免素(SjIP)進(jìn)行體外重組表達(dá)、純化。通過初步的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)評(píng)估重組蛋白rSjOAT和rSjIP在日本血吸蟲病免疫診斷中的應(yīng)用價(jià)值。 方法 以日本血吸蟲成蟲cDNA為模板,體外擴(kuò)增SjOAT和SjIP目的基因,以pET28a為載體轉(zhuǎn)化入大腸桿菌系統(tǒng)中;異丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá),優(yōu)化重組菌的誘導(dǎo)表達(dá)條件;大量誘導(dǎo)表達(dá)后,應(yīng)用Ni2+親和層析法純化rSjOAT、rSjIP; SDS-PAGE和Western blotting驗(yàn)證表達(dá)量和免疫活性。應(yīng)用重組抗原間接ELISA診斷日本血吸蟲病,并與日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原(SEA)的間接ELISA平行檢測(cè),比較兩種方法之間的敏感性、特異性和交叉反應(yīng)性的差異。 結(jié)果 成功構(gòu)建了表達(dá)型重組質(zhì)粒pET28a/SjOAT和pET28a/SjIP,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng),證實(shí)構(gòu)建的兩種質(zhì)粒均能表達(dá)。SDS-PAGE電泳分析可見相對(duì)分子質(zhì)量約50KDa和55KDa處有SjOAT、SjIP融合蛋白的表達(dá);Western blotting檢測(cè)結(jié)果表明rSjOAT、rSjIP能被抗His-tag單克隆抗體、血吸蟲病患者血清識(shí)別。純化后的SjOAT蛋白濃度達(dá)0.53，

本文編號(hào)：2439137