【摘要】：背景 1939年發(fā)現(xiàn)了Rh血型系統(tǒng),隨后的臨床研究證明該系統(tǒng)抗原抗體不匹配能引起溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病和自身免疫性溶血性貧血等疾病。Rh血型系統(tǒng)是人類30個紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中最復(fù)雜最富有多態(tài)性的一個系統(tǒng),其臨床重要性僅次于ABO血型系統(tǒng)。RH基因存在豐富的人種和民族遺傳差異,這種遺傳背景差異在東方人中尤為復(fù)雜,RH基因不僅在編碼區(qū)存在多態(tài)性,而且在非編碼區(qū)也富有多態(tài)性。 RH基因由位于1p34.3—lp36.1上的2個同源性高達(dá)96%以上的RHD和RHCE基因組成。RHD基因編碼RhD多肽,RHCE基因編碼RhC/c和RhE/e多肽。RHC與RHc等位基因相比,僅有6個核苷酸不同,分別是位于48、150、178、201、203和307位的核苷酸,在這些位置上RHC等位基因分別是C、T、A、G、G和T,而RHc等位基因則分別是G、C、C、A、A和C。其中唯有由307位堿基編碼的103位脯氨酸位于細(xì)胞膜外,是決定Rhc抗原性的關(guān)鍵位置,也是決定RHc基因分型特異性的關(guān)鍵位點。 據(jù)報道白種人中帶有Rhc抗原個體其RHCE基因外顯子(exon)2的307位100%都是C,國內(nèi)外的研究證明,針對此位點設(shè)計特異性檢測引物檢測RHc等位基因結(jié)果均正確。然而,國外研究結(jié)果顯示對于RHC等位基因的基因定型結(jié)果總令人不滿意。研究表明白種人中具有RhC抗原個體其RHCE基因內(nèi)含子(intron)2都有109bp插入序列,然而,有研究顯示利用這一多態(tài)性來檢測RHC等位基因存在假陰性。另據(jù)報道白種人RHC等位基因在外顯子1的nt48位100%是C,然而白種人中有5.2%的RHc等位基因在此位點發(fā)生GC突變,而且,表型為Rhcc非洲黑人中74%個體外顯子1的48位都是C。另有報道RHCE基因外顯子5的733位核苷酸存在CG多態(tài)性,在白種人中為2%,在非洲裔黑人中為50%,亞洲人尚未見到相關(guān)報道。 對中國南方漢族和西藏藏族RHCE基因多態(tài)性的比較研究有助于深入了解中國人RH基因的結(jié)構(gòu)特點和民族遺傳背景差異,探討RH基因在進(jìn)化、重組和突變中的作用機(jī)制,揭示RHCE基因多態(tài)性的遺傳背景差異和民族差異,為RHCE基因的準(zhǔn)確定型奠定基礎(chǔ)。 目的 1.研究中國南方漢族人群和西藏藏族人群RHC等位基因exon1中48GC多態(tài)性,并比較兩民族在此位點的多態(tài)性差異。 2.研究中國南方漢族人群和西藏藏族人群RHC等位基因intron2中109bp插入序列缺失情況,并比較兩民族在此特異性的差異。 3.研究中國南方漢族人群和西藏藏族人群exon5中733CG多態(tài)性,并比較兩民族733CG多態(tài)性分布差異。 4.比較研究中國南方漢族和西藏藏族RHCc等位基因的多態(tài)性差異,探討中國人RHCc等位基因的基因定型方法的準(zhǔn)確性。 方法 1.樣本收集。187例健康隨機(jī)非血緣關(guān)系中國南方漢族人樣本由廣東省中醫(yī)院提供；51例健康隨機(jī)非血緣關(guān)系西藏藏族人(長期居住在西藏且三代內(nèi)未與外族通婚的藏族)樣本由西藏自治區(qū)血液中心提供。 2.采用微柱凝膠法對Rh表型進(jìn)行分型,對RhD初篩陰性樣本用抗人球蛋白法確認(rèn)。 3.應(yīng)用聚酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物法(Polymerase Chain Reaction-Sequence Specific Primer, PCR-SSP)對RHCE基因進(jìn)行基因定型。 4.設(shè)計特異性引物,應(yīng)用PCR-SSP方法對RHCE基因exon1的48GC多態(tài)性和intron2的109bp插入序列進(jìn)行檢測。 5.對篩選出的RHCc基因定型結(jié)果與表型不一致的樣本進(jìn)行測序,并分析其序列差異,探討RHCc基因定型方法的準(zhǔn)確性。 6.設(shè)計特異性檢測引物,應(yīng)用PCR-SSP方法對exon5的733CG多態(tài)性進(jìn)行檢測,并用測序方法驗證。 結(jié)果 1.中國南方漢族人群和中國西藏藏族人群RHCE基因exon1中存在48GC多態(tài)性,在漢族人群中為3.23%,在中國西藏藏族人群中為12%,二者相比存在統(tǒng)計學(xué)差異(X2=6.2,P0.01)。應(yīng)用RHCE基因exon1的48GC多態(tài)性來檢測中國南方漢族人群RHC基因,存在3.23%的假陽性,用來檢測中國西藏藏族人群RHC基因存在12%的假陽性。 2.在中國南方漢族人群中攜帶RhC抗原個體其RHCE基因intron2中109bp插入序列的缺失率為1.08%,在西藏藏族人群中缺失概率為0,二者缺失率相比無統(tǒng)計學(xué)差異(X2=1.2,P0.05)。應(yīng)用RHCE基因intron2的109bp插入序列來檢測中國南方漢族人群RHC等位基因存在1.08%的假陰性,用來檢測中國西藏藏族人群RHC等位基因是否可行尚需進(jìn)一步驗證。 3.中國南方漢族人群和西藏藏族人群所有樣本RHCE基因exon5的733位核甘酸均為G,未發(fā)現(xiàn)該位點存在733CG多態(tài)性。 結(jié)論 1.中國南方漢族人群在RHCE基因intron2中存在109bp插入序列缺失,在exon1存在48GC多態(tài)性,但未發(fā)現(xiàn)在exon5存在733CG多態(tài)性和突變情況。 2.中國西藏藏族人群在RHCE基因exon1存在48GC多態(tài)性,未發(fā)現(xiàn)intron2中存在109bp插入序列缺失,也未發(fā)現(xiàn)在exon5存在733CG多態(tài)性和突變。 3.中國南方漢族人群和西藏藏族人群在RHCE基因exon1的48GC多態(tài)性分布中存在差異,而在intron2的109bp插入缺失和exon5的733CG多態(tài)性方面未發(fā)現(xiàn)二者有差異。 4.針對exon1的48GC多態(tài)性位點和內(nèi)含子2的109bp插入序列來檢測RHCc基因會因突變和缺失而導(dǎo)致假陽性和假陰性錯誤。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R394

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 卓翠靈;;合肥師范學(xué)院新生靜脈血血紅蛋白調(diào)查分析[J];合肥師范學(xué)院學(xué)報;2011年06期

2 滕蘭菊,桂芳,黃剛,李秀平;公丁香等17種中草藥對腸道桿菌的體外抑菌實驗[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2004年05期

3 戴寧;李大偉;陳喬;程惠娟;;復(fù)方牛苓顆粒體外抑菌實驗研究[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2009年06期

4 陸杏華;何后軍;王萍;鄔向東;;豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌江西株的分離鑒定及PCR診斷[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年06期

5 秦國民;張曉君;陳翠珍;房海;閻斌倫;;錦鯉維氏氣單胞菌感染癥及其病原生物學(xué)特性研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年19期

6 敬娟;蔡正洪;唐靜;;川玄參不同溶劑萃取物的抗菌活性研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年21期

7 張健,葛淼,葛鑫,任中杰,陳瀟瀟,吳曉旭;我國中年女性血紅蛋白的正常參考值與地理因素關(guān)系的研究[J];安徽師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2004年01期

8 高云;599名健康體檢者血清脂類分析[J];安徽衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報;2002年02期

9 袁冬梅,寧光慈;雙縮脲法手工與上機(jī)測定24小時尿蛋白實驗觀察[J];安徽衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報;2003年05期

10 丁業(yè)榮,楊杰,范玉珍,時全,李朝陽,趙本海;產(chǎn)H_2S腸道致病性大腸埃希菌O_(128):K_(67)的發(fā)現(xiàn)與研究[J];安徽衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報;2003年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 陳濤;;影響生化血液標(biāo)本質(zhì)量的因素分析[A];甘肅省中醫(yī)藥學(xué)會2010年會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2010年

2 賀遠(yuǎn);;17例免疫相關(guān)性全血細(xì)胞減少癥臨床分析[A];貴州省2008年血液學(xué)年會論文匯編[C];2008年

3 祝乾清;羅龍星;史文浩;;金靈湯對感染動物療效的實驗觀察[A];2007年貴州省醫(yī)學(xué)會骨科學(xué)分會學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

4 蘇春力;賈寧;徐亞靜;張振鷺;張麗娜;;眼分泌物中分離出放線菌一例[A];第十九屆航天醫(yī)學(xué)年會暨第二屆航天護(hù)理年會論文匯編[C];2003年

5 蘇春力;賈寧;依偉;劉沈玲;張亞楠;;RF陽性對ELISA法檢測抗HBe的影響[A];第十九屆航天醫(yī)學(xué)年會暨第二屆航天護(hù)理年會論文匯編[C];2003年

6 肖伶俐;;痰培養(yǎng)211例檢出細(xì)菌及藥物敏感性分析[A];第十九屆航天醫(yī)學(xué)年會暨第二屆航天護(hù)理年會論文匯編[C];2003年

7 陳俊林;;全自動血細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)結(jié)果的影響因素分析[A];第二十一屆航天醫(yī)學(xué)年會暨第四屆航天護(hù)理年會論文匯編（上冊）[C];2005年

8 戚國祥;;痰標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查及耐藥性859例分析[A];第二十三屆航天醫(yī)學(xué)年會暨第六屆航天護(hù)理年會論文匯編[C];2007年

9 謝靈;溫立新;閆有青;;航天職工健康體檢數(shù)據(jù)7470例分析[A];第二十五屆航天醫(yī)學(xué)年會暨第八屆航天護(hù)理年會論文匯編[C];2009年

10 李艷林;;妊高癥患者凝血功能與血小板檢測的變化及臨床意義[A];第二十六屆航天醫(yī)學(xué)年會暨第九屆航天護(hù)理年會論文匯編[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 楊麗娟;環(huán)糊精/天然藥物的包合行為；氮雜稠環(huán)吲哚和芳基烯胺酮/酯的合成及生物活性研究[D];云南大學(xué);2010年

2 楊慶蕓;經(jīng)胃及陰道內(nèi)鏡膽囊切除術(shù)的動物實驗研究與初步臨床應(yīng)用[D];山東大學(xué);2011年

3 黃超;類天然雜環(huán)化合物的多樣性導(dǎo)向合成及其生物活性研究[D];云南大學(xué);2011年

4 劉立東;柴油機(jī)燃用F-T柴油的基礎(chǔ)研究[D];天津大學(xué);2011年

5 彭國平;磷酸化黃酮衍生物的合成及其構(gòu)效關(guān)系研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 王，

本文編號：2435972