【摘要】：研究背景 脂肪組織含有成熟脂肪細(xì)胞及脂肪組織來源干細(xì)胞(Adipose tissue derived stem cell,簡稱(?)ADSC)。成熟脂肪細(xì)胞在天花板培養(yǎng)下,吐脂變成具有干細(xì)胞特性的去分化脂肪細(xì)胞(Dedifferentiated FAT,簡稱DFAT)。ADSC和DFAT都已被證明具有分化為心肌樣細(xì)胞的能力。催產(chǎn)素(Oxytocin,簡稱OT)被證明能將胚胎腫瘤干細(xì)胞P19及P19CL6誘導(dǎo)分化成心肌細(xì)胞,但它能否將ADSC及DFAT細(xì)胞誘導(dǎo)成心肌細(xì)胞尚無報(bào)道。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?檢驗(yàn)OT能否將ADSC及DFAT誘導(dǎo)成為心肌樣細(xì)胞。 實(shí)驗(yàn)方法 從脂肪中分離得到ADSC及成熟脂肪細(xì)胞。通過天花板培養(yǎng)足成熟脂肪細(xì)胞去分化為DFAT。按照不同誘導(dǎo)的時(shí)間(1周,2周,3周)及不同濃度(10-8M,10-7M,10-6M)分組對ADSC和DFAT進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。通過RT-PCR,免疫熒光及Western Blot分別在基因水平和蛋白水平檢測心肌特異性標(biāo)記的表達(dá)。以人類心肌組織作為陽性對照,未加誘導(dǎo)的ADSC及DFAT細(xì)胞作為陰性對照。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 高濃度OT(10-6M)造成實(shí)驗(yàn)細(xì)胞大量死亡,無法進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。10-8M及10-7M濃度的催產(chǎn)素誘導(dǎo)三周后,ADSC和(?)DFAT在基因及蛋白水平檢測到心臟特異性標(biāo)記GATA4, NKX2.5,c-TnT的表達(dá),但是未發(fā)現(xiàn)自主搏動(dòng)現(xiàn)象。相同誘導(dǎo)條件下,兩種細(xì)胞在基因和蛋白水平無顯著差別。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論 生理濃度和中等濃度的催產(chǎn)素可以將ADSC及DFAI誘導(dǎo)成為心肌樣細(xì)胞。
[Abstract]:Background adipose tissue contains mature adipocytes and adipose tissue derived stem cells (Adipose tissue derived stem cell, (?) ADSC).) The ability of adipocytes to differentiate into cardiomyocyte-like cells (DFAT). ADSC and DFAT) has been proved to be able to differentiate into dedifferentiated adipocytes with stem cell characteristics in ceiling-cultured adipocytes. Oxytocin (Oxytocin,) has been proved to be able to induce the differentiation of embryonic tumor stem cells (P19 and P19CL6) into cardiomyocytes, but whether it can induce ADSC and DFAT cells into cardiomyocytes has not been reported. Objective to test whether OT can induce ADSC and DFAT into cardiomyocytes. Methods ADSC and mature adipocytes were isolated from fat. Dedifferentiation of mature adipocytes from ceilings to DFAT. ADSC and DFAT were cultured according to different induction time (1 week, 2 weeks, 3 weeks) and different concentration (10 -8 MN 10 -7 M 10 -6 M). The expression of myocardial specific markers was detected at gene level and protein level by RT-PCR, immunofluorescence and Western Blot, respectively. Human myocardial tissue was used as positive control and uninduced ADSC and DFAT cells as negative control. The results showed that high concentration of OT (10-6 M) resulted in a large number of cell death, which could not be followed up. After induction of oxytocin at 10-8 and 10-7 M concentrations for three weeks, The expression of cardiac specific marker GATA4, NKX2.5,c-TnT was detected in ADSC and (?) DFAT at gene and protein levels, but no autonomic pulsation was found. There was no significant difference in gene and protein levels between the two types of cells under the same induction conditions. Conclusion ADSC and DFAI can be induced into cardiomyocyte-like cells by oxytocin at physiological and medium concentrations.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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本文編號：2423066