【摘要】：背景和目的： 高糖可造成足細(xì)胞發(fā)生一系列損傷,包括足細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化,足細(xì)胞活力下降,凋亡增加等。糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3p,GSK-3p)在足細(xì)胞中含量豐富,功能多樣,參與了包括細(xì)胞黏附、轉(zhuǎn)分化、凋亡、遷移等多種病理生理過(guò)程。有研究發(fā)現(xiàn)GSK-3β抑制劑可誘導(dǎo)皮膚上皮細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化,亦有研究表明GSK-3β抑制劑可減少高糖條件下腎小球系膜細(xì)胞的凋亡。說(shuō)明目前對(duì)于GSK-3p抑制劑的作用還存在爭(zhēng)議。那么對(duì)于高糖刺激條件下的足細(xì)胞,GSK-3β抑制劑有無(wú)保護(hù)作用,及GSK-3β活性改變對(duì)高糖導(dǎo)致足細(xì)胞損傷的意義尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)擬利用RT-PCR、Western blot檢測(cè)足細(xì)胞標(biāo)記蛋白和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)變化,并利用流式細(xì)胞術(shù)及MTT法檢測(cè)足細(xì)胞足細(xì)胞活力變化及凋亡情況,觀察GSK-3p在高糖導(dǎo)致的足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和凋亡過(guò)程中的作用,及GSK-3p抑制劑對(duì)高糖損傷足細(xì)胞的意義。 方法 33℃許可條件下用含10%胎牛血清的RPM11640培養(yǎng)基培養(yǎng)條件永生化小鼠足細(xì)胞系,并在37-C非許可條件下培養(yǎng)14天誘導(dǎo)其分化,Western blot檢測(cè)Synaptopodin鑒定其分化成熟,將分化成熟的足細(xì)胞分為4組,(1)正常糖濃度組,足細(xì)胞培養(yǎng)基含葡萄糖5.6mmol/L,(2)高糖組,足細(xì)胞培養(yǎng)基含葡萄糖30mmol/L,(3)LiCl組,足細(xì)胞培養(yǎng)基含LiCl10mmol/L,(4)高糖+LiCl組,足細(xì)胞培養(yǎng)基含葡萄糖30mmol/L, LiCl10mmol/L,48小時(shí)后MTT法檢測(cè)足細(xì)胞存活率,RT-PCR檢測(cè)Bcl-2、Bax的mRNA水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)足細(xì)胞凋亡率,Western-blot檢測(cè)nephrin、α-SMA蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 1.　37℃非許可條件下培養(yǎng)14天,顯微鏡下觀察分化成熟的足細(xì)胞呈星形多突狀,核圓形,從胞體伸出很多突起,可見次級(jí)足突,Western-blot檢測(cè)分化成熟足細(xì)胞Synaptopodin表達(dá)陽(yáng)性。 2.按上述分組培養(yǎng)足細(xì)胞48小時(shí),MTF法檢測(cè)足細(xì)胞存活率,高糖組、高糖+LiCl組均較正常組明顯下降(P0.05),LiC1組較正常組下降(P0.05),高糖+LiC1組較高糖組存活率下降(P0.05)。 3. RT-PCR檢測(cè)Bcl-2mRNA水平,高糖組.LiC1組較正常組下降(P0.05),高糖+LiC1組基本無(wú)表達(dá)；Bax mRNA表達(dá)水平,高糖組、LiC1組較正常組增加(p0.05),高糖+LiC1組較正常組、高糖組明顯增加(p0.05)。 4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)足細(xì)胞凋亡率,高糖組較正常組增加(P0.05), LiC1組較正常組無(wú)明顯差異(P0.05),高糖+LiCl組較高糖組明顯增加(P0.05)。 5. Western-blot檢測(cè)nephrin表達(dá),高糖組、高糖+LiC1組、LiC1組均較正常組明顯減少(P0.05),高糖+LiCl組與高糖組相比表達(dá)進(jìn)一步下降(P0.05); α-SMA表達(dá),高糖組、高糖+LiC1組、LiC1組均較正常組明顯增多(P0.05),高糖+LiC1組與高糖組相比表達(dá)增多(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 1.高糖導(dǎo)致足細(xì)胞生存活力下降,GSK-3p抑制劑LiC1使高糖環(huán)境下的足細(xì)胞活力進(jìn)一步下降。 2.高糖可誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡,使抑凋亡基因Bcl-2mRNA表達(dá)減少,促凋亡基因Bax mRNA表達(dá)增加,GSK-3β抑制劑在高糖基礎(chǔ)上使上述改變更明顯。 3.GSK-3β抑制劑可使足細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化,使高糖誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)分化程度加深。
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【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2398398