【摘要】：乙型肝炎是一種嚴重威脅人類健康的疾病,如不及時治療,會導致肝硬化、肝癌等惡性疾病,甚至死亡。疫苗接種是預防乙肝的有效手段,但是對于乙肝治療尤其是慢性乙肝的治療卻作用甚微——傳統(tǒng)的疫苗主要誘導機體產生體液免疫反應,而產生的細胞免疫反應較弱,細胞免疫在清除機體內病毒發(fā)揮著核心作用。為此研發(fā)可引發(fā)高水平細胞免疫反應的疫苗成為疫苗研究的熱點。治療性疫苗因可誘發(fā)強烈的細胞免疫而受到研究人員的青睞,而DNA疫苗則是治療性疫苗中頗具前景的一員。 DNA疫苗雖可誘發(fā)較為理想的細胞和體液免疫反應,但仍存在一定不足,即在個體較大的動物以及人中誘發(fā)的免疫反應較弱,免疫效果不理想。為此研究人員通過不同途徑尋求克服此缺點的方法。佐劑可以有效增強抗原引發(fā)的免疫反應并有效延長其發(fā)揮效用的時間,故被認為是一種增強疫苗免疫效果的理想方法。黃芪多糖(APS)是中藥黃芪的主要活性成分,具有良好的免疫增強作用,可促進機體CD4+T淋巴細胞的增殖以及IL-2和IFN-γ的水平,促進脾細胞以及B淋巴細胞的增殖,同時可以促使樹突細胞成熟,增強其抗原呈遞能力并激活巨噬細胞。本研究選取黃芪多糖作為佐劑,與重組pcDS2質粒一同免疫小鼠,通過檢測小鼠體液和細胞免疫反應水平來評價其對小鼠免疫反應的影響；并研究其對樹突細胞成熟的作用,以期闡明其影響免疫反應的機理。 本研究選取6-8周齡健康雌性昆明白小鼠50只,隨機分為5組,每組10只。各試驗組處理分別為：空白對照,僅注射質粒載體,僅注射重組的pcDS2質粒,注射pcDS2質粒和APS,僅注射APS,并依次命名為Naive組、pcDNA3組、pcDS2組、pcDS2+APS組和APS組。初次免疫時間設為0天,初免后的第14和第28天各加強免疫一次,于第35天采集血清測定抗體含量,制備脾臟細胞懸液測定T細胞增殖能力、表面分子及細胞因子的表達水平、CTL殺傷能力以及信號通路分子NF-κB和p38 MAPK表達水平。本研究取得的結果如下： Naive組、pcDNA3組和APS組抗體水平為陰性,pcDS2+APS組抗體含量(8464.8ng/ml)顯著高于pcDS2組(3319.6ng/ml)。CD4+T細胞表達IL-4水平(用表達IL-4 CD4+T細胞占總CD4+T細胞的比例來表示)Naive組、pcDNA3組、pcDS2組、pcDS2+APS組、APS組分別為0.64%、0.97%、1.06%、1.42%、0.90%,其中pcDS2+APS組明顯高于其它對照組,說明APS可誘導機體免疫反應向Th2型發(fā)展。上述結果表明APS作為佐劑可增強小鼠的體液免疫反應。 Naive組、pcDNA3組、pcDS2組、pcDS2+APS組、APS組的T細胞增殖刺激指數分別為1.4、1.4、2.4、3.2和1.7。pcDS2+APS組顯著高于其他對照組,表現(xiàn)出最佳的增殖能力。CD4’T細胞IL-2表達水平Naive組、pcDNA3組、pcDS2組、pcDS2+APS組以及APS組分別為0.26%、0.43%、0.58%、3.42%和0.36%。pcDS2+APS組IL-2表達水平最高,顯著高于其他組,說明APS具有良好的促T細胞增殖能力。CD4’T細胞和CD8’T細胞IFN-y的表達水平各組(順序同前)分別為0.10%和0.21%、O.10%和0.27%、0.11%和0.30%、0.23%和0.43%以及O.14%和0.27%。pcDS2+APS組表達水平與其它各組相比差異顯著,說明APS具備誘導機體Thl型免疫反應的能力。體內CTL殺傷實驗pcDS2+APS組殺傷靶細胞的水平最高(56.5%),亦顯著高于其它對照組(Naive組2%,pcDNA3組5.9%,pcDS2組27.6%,APS組3.9%)以上結果表明APS作為佐劑可增強小鼠的細胞免疫反應。 共刺激信號分子CD40、CD80、CD86的表達水平分別為Naive組0.69%、0.57%、0.49%,pcDNA3組0.66%、0.51%、0.55%,pcDS2組0.92%、0.77%、0.88%,pcDS2+APS組1.15%、1.10%、1.23%,APS0.78%、0.64%、0.78%,其中pcDS2+APS組三種分子的表達均高于其它對照組,顯示出最強的為T細胞激活提供第二信號的能力；DCMHCI類和II類分子以及趨化因子受體CCR7的表達亦為pcDS2+APS組表達水平最高。此外,pcDS2+APS組中參與DC成熟信號通路的分子NF-κB和p38 MAPK表達水平也高于其他試驗組。以上結果表明APS促進了免疫小鼠樹突細胞的成熟。 綜上所述,APS作為HBV DNA疫苗佐劑可促進免疫小鼠DC成熟,提高Th活性,增強細胞和體液免疫反應。本研究為增強HBV DNA疫苗的免疫效果提供新的途徑,同時表明APS具備良好的佐劑潛力,展示出良好的應用前景。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：四川農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 ;Astragalus mongholicus ameliorates renal fibrosis by modulating HGF and TGF-β in rats with unilateral ureteral obstruction[J];Journal of Zhejiang University(Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal);2009年05期

2 唐保東;;慢性乙型肝炎抗病毒治療研究新進展[J];中國處方藥;2005年12期

3 王燕平,李曉玉,宋純青,胡之璧;黃芪皂甙Ⅳ對小鼠T、B淋巴細胞增殖和腹腔巨噬細胞功能的影響(英文)[J];Acta Pharmacologica Sinica;2002年03期

4 ;Hypoglycemic effect of Astragalus polysaccharide and its effect on PTP1B[J];Acta Pharmacologica Sinica;2005年03期

5 Lloyd Reeve-Johnson;;Effect of Astragalus polysaccharides on Erythrocyte Immune Adherence of Chickens Inoculated with Infectious Bursal Disease Virus[J];Agricultural Sciences in China;2007年11期

6 莊輝,斯崇文;第八次全國病毒性肝炎學術會會議紀要[J];中華傳染病雜志;1997年03期

7 張再勤,趙賽仙;檢驗的各種廢液中乙型肝炎病毒分析[J];中華醫(yī)院感染學雜志;2001年01期

8 ;Astragalus extract inhibits destruction of gastric cancer cells to mesothelial cells by anti-apoptosis[J];World Journal of Gastroenterology;2009年05期

9 ;Astragalus mongholicus polysaccharide inhibits lipopolysaccharide-induced production of TNF-α and interleukin-8[J];World Journal of Gastroenterology;2009年29期

10 ;Inhibitory effect of emodin and Astragalus polysaccharide on the replication of HBV[J];World Journal of Gastroenterology;2009年45期

，

本文編號：2398326