發(fā)布時(shí)間：2018-12-15 16:00

【摘要】：目的：人Tudor-SN蛋白是一種廣泛表達(dá)于胞漿中的多功能RNA結(jié)合蛋白,它可以參與細(xì)胞內(nèi)多種生物學(xué)過(guò)程。應(yīng)激顆粒(Stress Granules, SGs)是存在于胞漿中的含有mRNA的顆粒結(jié)構(gòu),它是在細(xì)胞應(yīng)答應(yīng)激時(shí)聚集產(chǎn)生的。研究發(fā)現(xiàn)Tudor-SN蛋白在應(yīng)激刺激下可以與G3BP蛋白產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)共定位。因此本課題旨在研究Tudor-SN蛋白如何參與SGs以及胞漿中另一類RNA顆粒即加工小體(Processing-bodies, P-bodies)的聚集功能,從而探討Tudor-SN蛋白在mRNA的轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控過(guò)程中的作用機(jī)制。 方法：本課題實(shí)驗(yàn)分為四部分,第一部分是利用免疫熒光抗體染色技術(shù)研究Tudor-SN參與SGs的聚集并與TIA-1蛋白的細(xì)胞內(nèi)定位；第二部分實(shí)驗(yàn)利用同樣的實(shí)驗(yàn)方法研究Tudor-SN參與P-bodies的聚集并與Ago2蛋白和Dcp-1蛋白的細(xì)胞內(nèi)定位；第三部分實(shí)驗(yàn)利用siRNA干擾技術(shù)和免疫熒光抗體染色技術(shù)研究RNAi后的Tudor-SN低表達(dá)對(duì)于SGs形成的影響。第四部分實(shí)驗(yàn)是利用免疫熒光抗體染色技術(shù)研究Tudor-SN蛋白在參與SGs聚集過(guò)程中的動(dòng)態(tài)運(yùn)輸過(guò)程。 結(jié)果：1.Tudor-SN蛋白在應(yīng)激刺激下參與SGs的聚集并通過(guò)其SN domain與TIA-1蛋白存在細(xì)胞內(nèi)共定位,但是Tudor-SN蛋白聚集到SGs的過(guò)程滯后于TIA-1。2.Tudor-N蛋白在應(yīng)激刺激下參與P-bodies的聚集并與Ago2蛋白和Dcp1蛋白分別形成細(xì)胞內(nèi)共定位。3.RNAi后的細(xì)胞內(nèi)Tudor-SN蛋白低表達(dá)不會(huì)阻止SG聚集,但會(huì)影響SGs的致密程度和大小。4.Tudor-SN蛋白在參與SGs形成過(guò)程中依賴于微管蛋白(Microtubules)——α-Tubulin。 結(jié)論：Tudor-SN蛋白作為一種RNA結(jié)合蛋白不僅可以參與SGs的聚集,也可以參與P-bodies的聚集,是被新發(fā)現(xiàn)的RNA顆粒共享蛋白組分,并在應(yīng)答應(yīng)激時(shí)可以與SGs的標(biāo)志蛋白TIA-1及P-bodies的標(biāo)志蛋白Dcp1產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)共定位。但它并不是SGs聚集的啟動(dòng)蛋白組分,它在應(yīng)激條件下聚集到SGs的過(guò)程依賴于微管蛋白α-Tubulin的支持和引導(dǎo)作用。
[Abstract]:Aim: human Tudor-SN protein is a multifunctional RNA binding protein widely expressed in cytoplasm. Stress particle (Stress Granules, SGs) is a mRNA-containing granular structure in the cytoplasm. It is produced when the cell responds to stress. It was found that Tudor-SN protein could co-locate with G3BP protein under stress stimulation. Therefore, the purpose of this study was to investigate how Tudor-SN proteins participate in the aggregation of SGs and another type of RNA particles in the cytoplasm, that is, the processing body (Processing-bodies, P-bodies). To explore the role of Tudor-SN protein in the posttranscriptional gene regulation of mRNA. Methods: the experiment was divided into four parts. The first part was to study the role of Tudor-SN in the aggregation of SGs and the intracellular localization of TIA-1 protein by immunofluorescence antibody staining. In the second part, the same method was used to study the role of Tudor-SN in the aggregation of P-bodies and the intracellular localization of Ago2 protein and Dcp-1 protein. In the third part, siRNA interference technique and immunofluorescence antibody staining were used to study the effect of low expression of Tudor-SN after RNAi on the formation of SGs. In the fourth part, immunofluorescence antibody staining was used to study the dynamic transport of Tudor-SN protein in the process of SGs aggregation. Results: 1.Tudor-SN protein was involved in the aggregation of SGs under stress and co-located with TIA-1 protein through its SN domain. However, the aggregation of Tudor-SN protein to SGs lagged behind that of TIA-1.2.Tudor-N protein involved in P-bodies aggregation under stress and co-located with Ago2 protein and Dcp1 protein respectively. Low expression of Tudor-SN protein does not prevent SG aggregation. However, it will affect the density and size of SGs. 4.Tudor-SN protein is dependent on tubulin (Microtubules)-偽-Tubulin. in the process of SGs formation. Conclusion: as a kind of RNA binding protein, Tudor-SN protein can not only participate in the aggregation of SGs, but also participate in the aggregation of P-bodies. It is a newly discovered component of RNA granule sharing protein. In response to stress, SGs marker protein TIA-1 and P-bodies marker protein Dcp1 produced intracellular localization. However, it is not the promoter component of SGs aggregation. The process of aggregation to SGs under stress depends on the support and guidance of tubulin 偽-Tubulin.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2380924