【摘要】：Cell-in-cell是指一個(gè)或多個(gè)活的細(xì)胞進(jìn)到另一個(gè)細(xì)胞的胞漿內(nèi)，形成細(xì)胞套疊結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象，可以發(fā)生在同質(zhì)細(xì)胞間，也可以發(fā)生在異質(zhì)細(xì)胞間。對(duì)這一現(xiàn)象的描述可以追溯到近一百年前，但大多限于現(xiàn)象的報(bào)道，直到近年關(guān)于腫瘤細(xì)胞cell-in-cell胞內(nèi)死亡被重新命名為entosis[1]，并認(rèn)為這是一類新型細(xì)胞死亡方式，這一現(xiàn)象才重新被認(rèn)識(shí)，并快速成為一個(gè)新的研究 熱點(diǎn)‖。 論文作者所在研究團(tuán)隊(duì)30年前就發(fā)現(xiàn)：NK細(xì)胞可以鉆入瘤細(xì)胞，并從內(nèi)部殺傷靶細(xì)胞，但其自身命運(yùn)是在瘤細(xì)胞內(nèi)自身降解，而且具有凋亡的典型特征[2]；論文作者在碩士研究期間再次證實(shí)了這一發(fā)現(xiàn)，并進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞在瘤細(xì)胞內(nèi)的死亡是caspase通路依賴性死亡[3]，既不同于近年新發(fā)現(xiàn)的同質(zhì)腫瘤細(xì)胞間發(fā)生的細(xì)胞溶酶體通路的細(xì)胞胞內(nèi)死亡-entosis,也不同于細(xì)胞自食現(xiàn)象（cannibalism）中瘤細(xì)胞 吃‖免疫細(xì)胞的過程，被學(xué)者認(rèn)為是一種新的細(xì)胞胞內(nèi)死亡現(xiàn)象[4]，我們稱之為emtosis（emperipolesis+entosis）。 在此基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步擴(kuò)大對(duì)各類不同細(xì)胞間發(fā)生的cell-in-cell現(xiàn)象進(jìn)行了探討，對(duì)同質(zhì)和異質(zhì)細(xì)胞間，特別是免疫細(xì)胞-瘤細(xì)胞間發(fā)生的細(xì)胞胞內(nèi)死亡進(jìn)行了比較，并重點(diǎn)解析了emtosis形成的機(jī)制。此外對(duì)于免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞相互作用產(chǎn)生的cell-in-cell現(xiàn)象的臨床生物學(xué)意義也開展了初步的研究，旨在探索cell-in-cell與臨床疾病發(fā)生的關(guān)系。 研究的主要結(jié)果如下：細(xì)胞胞內(nèi)死亡是cell-in-cell現(xiàn)象的主要結(jié)果，在同質(zhì)腫瘤細(xì)胞或異質(zhì)腫瘤細(xì)胞間發(fā)生的細(xì)胞胞內(nèi)死亡主要是溶酶體介導(dǎo)的死亡模式（entosis），而免疫細(xì)胞特別是殺傷細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間甚至正常細(xì)胞之間發(fā)生的細(xì)胞胞內(nèi)死亡主要是caspase依賴的凋亡模式（emtosis），但不具備殺傷活性的正常免疫細(xì)胞或白血病細(xì)胞（B細(xì)胞、CCRF、Raji等）在腫瘤細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞胞內(nèi)死亡也是溶酶介導(dǎo)的死亡模式即entosis。以上研究結(jié)果說明，細(xì)胞胞內(nèi)死亡模式并不限于同質(zhì)或異質(zhì)細(xì)胞的相互作用，可能與細(xì)胞自身特定的生物學(xué)性質(zhì)相關(guān)。 由于entosis研究所采用的瘤細(xì)胞MCF7是一株caspase3缺陷細(xì)胞[5,6]，因此在該細(xì)胞系間發(fā)生的溶酶體介導(dǎo)的細(xì)胞胞內(nèi)死亡（entosis）可能與其caspase3基因缺陷有關(guān)[7]。因此，我們分別將此細(xì)胞系用于entosis和emtosis的兩對(duì)瘤細(xì)胞之一進(jìn)行了比較研究。研究結(jié)果證實(shí)，無論在DNA和mRNA水平、還是在蛋白質(zhì)水平，MCF7的確是一株caspase3基因缺陷株，不能被經(jīng)典的凋亡誘導(dǎo)劑staurosporine誘導(dǎo)出現(xiàn)凋亡的各項(xiàng)特征。相反，在emtosis研究中所采用的非caspase3基因缺陷的靶細(xì)胞A431株可以被誘導(dǎo)呈現(xiàn)為典型的凋亡特征。兩種細(xì)胞都可以發(fā)生高比例的cell-in-cell現(xiàn)象，主要特征也是細(xì)胞胞內(nèi)死亡，兩種細(xì)胞出現(xiàn)的細(xì)胞胞內(nèi)死亡均具備典型的entosis特征，與其是否存在caspase3基因缺陷無關(guān)。相反，無論進(jìn)入MCF7還是A431的NK細(xì)胞所發(fā)生的細(xì)胞胞內(nèi)死亡均為典型的caspase依賴的凋亡，即emtosis，提示胞內(nèi)細(xì)胞以何種形式死亡取決于進(jìn)入細(xì)胞的性質(zhì)和特征。 在上述基礎(chǔ)上我們分別對(duì)entosis與emtosis形成的機(jī)制進(jìn)行了探討，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：發(fā)生entosis胞內(nèi)死亡模式的細(xì)胞內(nèi)有氧自由基的明顯聚集，并且有線粒體凋亡通路的凋亡因子細(xì)胞色素C的釋放；胞內(nèi)細(xì)胞和cell-in-cell的空泡結(jié)構(gòu)上有自噬標(biāo)志性蛋白LC3的聚集；溶酶體功能被抑制后的胞內(nèi)細(xì)胞死亡模式可以從entosis轉(zhuǎn)換成emtosis，并且細(xì)胞死亡速度明顯提前。以上的證據(jù)提示entosis實(shí)際上是一個(gè)自噬的過程，通過啟動(dòng)自噬通路來抵抗cell-in-cell后內(nèi)部環(huán)境造成的凋亡啟動(dòng)，，以此來獲得生存機(jī)會(huì)，然而持續(xù)擴(kuò)大的自噬行為最終將細(xì)胞降解，這一初步結(jié)果與2011年Overholtzer實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)論是一致的。但對(duì)emtosis機(jī)制的研究與entosis有完全不同的結(jié)論。我們的研究表明：不同的免疫細(xì)胞在腫瘤細(xì)胞內(nèi)發(fā)生不同的細(xì)胞胞內(nèi)死亡是與其是否具備殺傷活性密切相關(guān)，只有殺傷活性的免疫細(xì)胞發(fā)生的細(xì)胞胞內(nèi)死亡具備emtosis的特征。進(jìn)一步采用免疫熒光、顆粒酶B活性抑制劑和顆粒酶B缺陷小鼠來源的殺傷細(xì)胞對(duì)emtosis的形成機(jī)制進(jìn)行了深入研究。結(jié)果表明：（1）無論由人體新鮮分離制備的，還是白血病細(xì)胞系來源的免疫樣細(xì)胞，只有表達(dá)顆粒酶B、并具有殺傷活性的免疫細(xì)胞才會(huì)出現(xiàn)emtosis，而不表達(dá)顆粒酶B的免疫細(xì)胞如Ｂ細(xì)胞、單核細(xì)胞等只能發(fā)生entosis。（2）顆粒酶B抑制劑處理對(duì)emtosis具有非常顯著的抑制作用，顆粒酶B缺陷小鼠的LAK細(xì)胞發(fā)生的emtosis時(shí)間上也出現(xiàn)明顯延遲。（3）動(dòng)態(tài)觀察也發(fā)現(xiàn)進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)的殺傷細(xì)胞可以釋放具有活性的顆粒酶B，但顆粒酶B大部分聚集在其自身周圍，與靶細(xì)胞外殺傷細(xì)胞的顆粒酶B擴(kuò)散至靶細(xì)胞胞漿內(nèi)呈明顯反差。因此推測(cè)emtosis很可能是由進(jìn)入胞內(nèi)的殺傷細(xì)胞自我分泌的顆粒酶B 反殺‖所致，這種殺傷細(xì)胞的細(xì)胞胞內(nèi)死亡既可能是一種殺傷過程中的 誤傷 ，也可能是殺傷細(xì)胞自身一種新的平衡和自穩(wěn)機(jī)制。 此外，研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)cell-in-cell所導(dǎo)致的效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞的命運(yùn)是多樣的，產(chǎn)生的后果也是多樣的：免疫細(xì)胞進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，或進(jìn)入正常細(xì)胞能明顯導(dǎo)致靶細(xì)胞形成多核的異倍體細(xì)胞；cell-in-cell現(xiàn)象在體外發(fā)生的幾率比預(yù)期的要高，在所篩選的近百余種細(xì)胞系中，逾70%的細(xì)胞可以出現(xiàn)cell-in-cell現(xiàn)象，而且cell-in-cell還廣泛出現(xiàn)在體內(nèi)包括腫瘤與其癌旁組織在內(nèi)的各類炎癥組織中，為進(jìn)一步研究cell-in-cell的臨床生物學(xué)意義提供了基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R392.1

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 劉雪花;侯小燕;莊英幟;董琳;;蘆薈凝膠對(duì)多柔比星外滲性損傷的防治及其機(jī)制初探[J];南華大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年05期

2 楊宏梅;邢影;鄭美珍;;米托蒽醌對(duì)大鼠胃癌基因PCNA、Caspase-3和p53基因表達(dá)的影響[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年05期

3 王一;連小云;張玎;王暉;高秋英;高瑛;王歧山;;甲異靛對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖和凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2011年07期

4 馬秀龍;鄧懷慈;劉小平;;蘆薈膠對(duì)放、化療所致骨髓抑制保護(hù)作用的研究[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2013年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 趙琳;魏敏杰;;FANCF基因沉默通過激活JNK和p38信號(hào)通路增加乳腺癌細(xì)胞對(duì)米托蒽醌的敏感性[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)化療藥理學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 羅沙陽;雌激素對(duì)阿霉素引起的乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響及其實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 吳敬;ADP-核糖基化因子抑制劑在堿燒傷誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性角膜新生血管中作用的研究[D];蘇州大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2357510