【摘要】：目的 通過(guò)研究?jī)煞N新型光敏劑17-5-氨基-1-戊磺酸竹紅菌乙素衍生物（PENSHB）和15-脫乙�；�13-3-氨基-1-丙磺酸竹紅菌乙素衍生物（DPROHB）在人胃腺癌細(xì)胞BGC-823中的吸收特性和細(xì)胞內(nèi)分布情況、光動(dòng)力效應(yīng)對(duì)細(xì)胞和線粒體的損傷規(guī)律及其暗毒性和安全性，初步了解這兩種新型光敏劑在細(xì)胞水平的吸收特點(diǎn)、光動(dòng)力效應(yīng)及其安全性。 方法與結(jié)果 （1）竹紅菌乙素衍生物PENSHB、DPROHB在BGC-823細(xì)胞中吸收特性的研究。以濃度為4μM的PENSHB、DPROHB溶液分別孵育人胃腺癌BGC-823細(xì)胞0、0.5、1、2、4和8h，用熒光分光光度計(jì)測(cè)定細(xì)胞裂解液中的熒光強(qiáng)度，，通過(guò)熒光強(qiáng)度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出光敏劑在細(xì)胞中的含量，并繪制每種光敏劑的孵育時(shí)間-細(xì)胞含量關(guān)系曲線。以濃度為0.5、1、2、4和8μM的兩種光敏劑分別孵育BGC-823細(xì)胞4h，測(cè)定細(xì)胞裂解液中的光敏劑熒光強(qiáng)度，繪制孵育濃度-細(xì)胞含量曲線。結(jié)果顯示，BGC-823細(xì)胞對(duì)PENSHB和DPROHB的吸收隨孵育時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，1h內(nèi)細(xì)胞吸收較快，4h達(dá)到平臺(tái)，變化趨勢(shì)兩種光敏劑相近。在本實(shí)驗(yàn)的濃度范圍內(nèi)BGC-823細(xì)胞對(duì)PENSHB和DPROHB的吸收隨孵育濃度的增高而增加，基本呈線性關(guān)系，上升趨勢(shì)兩種光敏劑相似�？梢�(jiàn)BGC-823細(xì)胞對(duì)PENSHB、DPROHB的吸收量依賴(lài)于光敏劑孵育時(shí)間及孵育濃度。 （2）PENSHB、DPROHB和HB在BGC-823細(xì)胞內(nèi)的分布及線粒體損傷研究。在避光條件下，采用濃度為200nM的Mito-Tracker Green（線粒體綠色熒光探針）孵育細(xì)胞30min標(biāo)記線粒體，濃度為4μM的光敏劑PENSHB、DPROHB、HB分別孵育BGC-823細(xì)胞1h、4h。激光共聚焦顯微鏡采集圖像，觀察光敏劑在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。并對(duì)光動(dòng)力作用后線粒體的損傷效應(yīng)進(jìn)行了觀察。結(jié)果顯示，三種光敏劑孵育細(xì)胞1h、4h后，廣泛分布于細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，其中能定位于線粒體上，但均不進(jìn)入細(xì)胞核；孵育4h時(shí)，光敏劑在細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度較1h強(qiáng)，在細(xì)胞核周?chē)奂潭仍黾�，PDT作用后可引起線粒體損傷，并產(chǎn)生大量活性氧，PENSHB、DPROHB作用強(qiáng)于HB。 （3）PENSHB、 DPROHB和HB對(duì)BGC-823細(xì)胞的光動(dòng)力殺傷效應(yīng)及暗毒性研究。光毒組（PDT組）：用不同濃度的PENSHB、DPROHB、HB分別孵育BGC-823細(xì)胞4h后，采用波長(zhǎng)為532nm激光，功率密度20mW/cm2，照射1000s。暗毒組（單純光敏劑組）：僅光敏劑孵育24h，不予激光照射。用MTT法分別測(cè)定各組細(xì)胞的存活率。繪制光敏劑對(duì)細(xì)胞光毒及暗毒的殺傷曲線，擬合曲線方程，計(jì)算光動(dòng)力半數(shù)殺傷濃度（IC50-PDT)及暗毒半數(shù)殺傷濃度（IC50-DT），并依此計(jì)算光敏劑的安全系數(shù)。結(jié)果顯示， PENSHB、DPROHB及HB對(duì)BGC-823細(xì)胞的光毒半數(shù)殺傷濃度（IC50-PDT）分別為26.47、27.33、47.30nM；PENSHB和DPROHB的IC50-PDT顯著低于HB的IC50-PDT（P0.01），而PENSHB與DPROHB的IC50-PDT相比差異無(wú)顯著性（P0.05），提示PENSHB和DPROHB的光動(dòng)力作用強(qiáng)度相似，兩者均明顯高于HB。PENSHB、DPROHB及HB的暗毒半數(shù)殺傷濃度（IC50-DT）分別為3.32、4.03、4.06μM，三者間差異無(wú)顯著性（P0.05），提示三者本身（即在不照光條件下）均無(wú)明顯細(xì)胞毒性作用。PENSHB、DPROHB及HB的安全系數(shù)依次為125.43、147.46、85.84，提示兩種新型光敏劑均較HB更加安全有效。 結(jié)論 通過(guò)分子修飾的兩種新型竹紅菌乙素衍生物PENSHB和DPROHB的理化特性得到優(yōu)化，能被體外培養(yǎng)的BGC-823細(xì)胞快速吸收，廣泛分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)和線粒體，其吸收量與孵育濃度和時(shí)間呈正相關(guān)；對(duì)BGC-823細(xì)胞株的PDT殺傷作用較其母體HB明顯增強(qiáng)、暗毒性無(wú)顯著差異、安全性明顯提高。研究結(jié)果表明，PENSHB和DPROHB是較HB更加安全有效的新型光敏劑，具有良好的應(yīng)用開(kāi)發(fā)前景。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2356989