發(fā)布時間：2018-11-15 08:41

【摘要】：目的獲得日本血吸蟲Nanos樣蛋白基因的cDNA序列,克隆、表達和純化原核蛋白并初步鑒定。方法應用PCR法擴增獲得日本血吸蟲Nanos樣基因的完整開放閱讀框(ORF),將該基因亞克隆到原核表達載體pET28a(+),誘導表達并純化融合蛋白。用純化后的蛋白免疫家兔,制備該蛋白的多克隆抗體,分別用ELISA和Western blot法對表達蛋白進行初步鑒定。結果該基因為日本血吸蟲的一個新基因,其編碼序列的ORF為672 bp,編碼223個氨基酸,理論相對分子量為25 ku;半定量RT-PCR技術分析顯示該基因在日本血吸蟲的蟲卵及各期蟲體有不同的表達量;成功構建了該基因的重組表達質(zhì)粒pET28a(+)-SjNanos,并在大腸埃希菌中獲得表達,Western blot分析表明該重組蛋白具有較好的免疫原性。結論獲得日本血吸蟲Nanos蛋白編碼基因的全長ORF,在大腸桿菌中克隆表達了日本血吸蟲Nanos樣基因,并制備了特異性多克隆抗體,為進一步研究其在日本血吸蟲生殖生物學中的功能奠定了基礎。
[Abstract]:Objective to obtain the cDNA sequence of Schistosoma japonicum Nanos like protein gene, clone, express and purify prokaryotic protein and identify it. Methods the complete open reading frame (ORF), of Nanos like gene of Schistosoma japonicum was amplified by PCR. The gene was subcloned into prokaryotic expression vector pET28a (), and the fusion protein was purified. The polyclonal antibody of the purified protein was prepared by immunizing rabbits. The expressed protein was preliminarily identified by ELISA and Western blot. Results this gene is a new gene of Schistosoma japonicum. Its ORF encoding sequence is 672 bp, and encoding 223 amino acids. The theoretical relative molecular weight is 25 ku;. Semi-quantitative RT-PCR analysis showed that the expression of the gene was different in the eggs of Schistosoma japonicum and in the body of different stages of Schistosoma japonicum. The recombinant expression plasmid pET28a ()-SjNanos, was successfully constructed and expressed in Escherichia coli., Western blot analysis showed that the recombinant protein had good immunogenicity. Conclusion the full-length ORF, encoding Nanos protein gene of Schistosoma japonicum was cloned and expressed in Escherichia coli, and the specific polyclonal antibody was prepared. It lays a foundation for further study of its function in the reproductive biology of Schistosoma japonicum.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學病原生物學教研室;
【基金】：國家自然科學基金(編號:30771882)
【分類號】：R383.24

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本文編號：2332793