【摘要】：長(zhǎng)期以來精子被認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄靜止的,其作用僅僅是將父本基因組DNA傳遞給卵子。但近年來研究證實(shí)成熟精子中存在大量復(fù)雜的mRNAs。通過基因芯片結(jié)合PCR的方法,在成熟精子中檢測(cè)出大約3500-5000種的mRNAs。研究發(fā)現(xiàn)精子中的mRNAs在受精過程中會(huì)傳遞給卵子,并且持續(xù)穩(wěn)定地存在,從而推測(cè)其可能在受精或胚胎早期發(fā)育過程中具有重要的作用。此外,另有研究表明精子中mRNAs在精子發(fā)生過程中選擇性地被保留下來,它們可能會(huì)在成熟精子中翻譯新生蛋白以替換降解的蛋白或者產(chǎn)生新的蛋白用于精子的獲能。 為了探究成熟精子中mRNA被選擇性保留的機(jī)制,我們以從人精子SAGE庫中克隆到的未知基因QSA為研究對(duì)象,從基因水平上檢測(cè)QSA的表達(dá)規(guī)律及時(shí)空分布從而推測(cè)其可能的生物學(xué)作用,并制備QSA融合蛋白作為抗原。本研究采用RT-PCR和原位雜交法檢測(cè)QSA在人和小鼠多種組織中的表達(dá)規(guī)律,并原核表達(dá)以及純化QSA融合蛋白作為抗原。RT-PCR結(jié)果顯示QSA在小鼠的睪丸、精子和受精卵中特異性表達(dá),而在小鼠卵細(xì)胞、囊胚等組織中未檢測(cè)到該基因的mRNA。原位雜交結(jié)果表明QSA在人的部分腺體組織(如睪丸、甲狀旁腺等)中顯著表達(dá)。根據(jù)基因QSA表達(dá)模式,推測(cè)其mRNA在獲能精子中的選擇性保留可能與某種激素的產(chǎn)生或分泌相關(guān),并且可能參與精子發(fā)生或早期胚胎發(fā)育過程,從而為精子傳遞具有父系效應(yīng)的mRNAs提供新的證據(jù)。
[Abstract]:Sperm has long been thought to be transcriptional stationary, only to transfer the paternal genomic DNA to the egg. But in recent years, studies have confirmed the existence of a large number of complex mRNAs. in mature spermatozoa About 3500-5000 species of mRNAs. were detected in mature spermatozoa by gene microarray combined with PCR. It has been found that mRNAs in spermatozoa is transmitted to the egg during fertilization and exists steadily, which suggests that it may play an important role in fertilization or early embryonic development. In addition, other studies have shown that mRNAs in spermatozoa is selectively preserved during spermatogenesis, and they may translate new proteins in mature spermatozoa to replace degraded proteins or produce new proteins for sperm capacitation. To explore the mechanism of selective retention of mRNA in mature spermatozoa, we studied QSA, an unknown gene cloned from human sperm SAGE library. The expression and temporal and spatial distribution of QSA were detected at the gene level in order to speculate its possible biological function. QSA fusion protein was prepared as antigen. In this study, RT-PCR and in situ hybridization were used to detect the expression of QSA in human and mouse tissues. Prokaryotic expression and purification of QSA fusion protein were used as antigens. RT-PCR results showed that QSA was present in the testis of mice. The mRNA. of the gene was not detected in mouse oocytes, blastocysts and other tissues. In situ hybridization showed that QSA was significantly expressed in some human glands (such as testis, parathyroid glands, etc.). Based on the QSA expression pattern, it is suggested that the selective retention of mRNA in capacitated sperm may be related to the production or secretion of certain hormones, and may be involved in spermatogenesis or early embryonic development. This provides new evidence for the transmission of patrilineal mRNAs by spermatozoa.
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392.1

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本文編號(hào)：2314076