【摘要】：目的： 通過優(yōu)化細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(Cytokine-induced killer cells, CIK細(xì)胞)的培養(yǎng)體系,提高CIK細(xì)胞的增殖能力和分泌細(xì)胞因子的能力,進而增強CIK細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞的殺傷能力,改善治療腫瘤的效果。 方法： 選取2011年8月至2012年1月在鄭州大學(xué)一附院行生物治療的腫瘤患者外周血32人份,提取外周血單個核細(xì)胞,用RPMI1640培養(yǎng)基重懸后平均分為四組,按照CIK細(xì)胞培養(yǎng)流程進行培養(yǎng),第0d在第一組中添加N-乙酰-D-乳糖胺(N-acetyl-D-lactosamine, LacNAc),第二組中添加LacNAc和抗-CD28單克隆抗體(抗-CD28mAb),第三組中添加抗-CD28mAb,第四組中添加等量的雙蒸水。在培養(yǎng)過程中分別在第4、8、10、12、14d用細(xì)胞計數(shù)法測定細(xì)胞增殖,在第7d用CFSE染色測定細(xì)胞增殖,在培養(yǎng)至12d從各組細(xì)胞中分別取1×106個細(xì)胞,檢測其分泌細(xì)胞因子IL-2、IL-10、IFN-γ以及TNF-α的能力,培養(yǎng)14d后檢測CIK細(xì)胞的細(xì)胞表型以及CIK細(xì)胞對靶細(xì)胞K562的殺傷能力。 結(jié)果： (1)各組中CIK細(xì)胞形態(tài)變化及增殖：在培養(yǎng)過程中在倒置顯微鏡(4×20)下觀察細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞體積逐漸變大,細(xì)胞漿越來越豐富,細(xì)胞核逐漸增大。第2-4d細(xì)胞開始聚集,成簇狀克隆樣生長,在鏡下觀察不到各組之間細(xì)胞形態(tài)的差異,在細(xì)胞計數(shù)的每個時間點LacNAc組、LacNAc聯(lián)合抗-CD28mAb組以及抗-CD28mAb組CIK細(xì)胞增殖的速度較對照組快,且具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=3.945,P0.05；F=2.341,P0.05；F=72.121,P0.05；F=121.118,P0.05；F=32.973,P0.05)。 (2)各組間分泌細(xì)胞因子的量：LacNAc組、LacNAc聯(lián)合抗-CD28mAb組以及抗-CD28mAb組分泌細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α的分泌量均較對照組高,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=5.87,P0.05；F=4.79,P0.05；F=5.2,P0.05),而前三組之間兩兩進行比較沒有明顯差異(P0.05)。 (3)各組之間各種細(xì)胞所占比率：各組之間進行比較發(fā)現(xiàn)LacNAc組、LacNAc聯(lián)合抗-CD28mAb組以及抗-CD28mAb組的CD8+細(xì)胞所占比例較對照組的高,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=5.03,P0.05),前三組中CD4+T淋巴細(xì)胞所占比率較對照組的低,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=4.63,P0.05),而LacNAc聯(lián)合抗-CD28niAb組中CD8+/CD4+的比值較對照組高,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=5.72,P0.05),而LacNAc組和抗-CD28mAb組與對照組CD8+/CD4+的比值比較無明顯差異(P0.05)。各組之間CD3+CD56+細(xì)胞所占比率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 (4)各組間對靶細(xì)胞K562的殺傷效能：對照組效應(yīng)細(xì)胞對靶細(xì)胞K562的殺傷率較LacNAc組、LacNAc聯(lián)合抗-CD28mAb組、抗-CD28mAb低,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=6.68,P0.05)。而LacNAc組、LacNAc聯(lián)合抗-CD28mAb組以及抗-CD28mAb組三組之間兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05) 結(jié)論： (1) LacNAc和抗-CD28mAb(?)有效提高CIK細(xì)胞群的增殖速度,LacNAc f口抗-CD28mAb均對CD8+T淋巴細(xì)胞具有促進擴增的效果,而對CD4+T細(xì)胞的效果不明顯； (2) LacNAc和抗-CD28mAb可以促進CIK細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ及TNF-α等細(xì)胞因子,且LacNAc和抗-CD28mAb的這種促進作用具有協(xié)同效應(yīng)； (3) LacNAc和抗-CD28mAb提高了CIK細(xì)胞對白血病細(xì)胞系K562的殺傷能力。新的培養(yǎng)體系優(yōu)于原來的培養(yǎng)體系。
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【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R363

【參考文獻】

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1 王歡;周芳堅;王其京;秦自科;黃麗惜;劉卓煒;韓輝;李永強;陳詩萍;夏建川;;負(fù)載自體腫瘤細(xì)胞裂解物的DC疫苗聯(lián)合CIK治療晚期腎癌的臨床觀察——附10例報告[J];癌癥;2006年05期

2 張志斌;梁景秋;王志華;袁玉濤;;IL-24增強細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞對HepG2的細(xì)胞毒活性[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2007年05期

3 徐道華,夏永鵬,邱宗蔭,吳玉章,賈正才,鄒麗云,周偉;γ干擾素增強CTL對宮頸癌細(xì)胞殺傷作用及其機制研究[J];免疫學(xué)雜志;2005年03期

4 李文娟;聶少平;余強;李景恩;謝明勇;;黑靈芝多糖對免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用[J];食品科學(xué);2009年19期

5 蔣允麗;費素娟;陳復(fù)興;劉軍權(quán);周忠海;;姜黃素對CIK細(xì)胞殺傷胃癌細(xì)胞株SGC-7901作用的影響及其機制的研究[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2010年04期

6 詹林盛,張新生,吳小紅,王之賢;褐藻多糖對小鼠淋巴細(xì)胞功能和細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響[J];營養(yǎng)學(xué)報;2001年02期

7 姚光弼;丙型病毒性肝炎治療的進展和具體實施[J];肝臟;2004年S1期

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本文編號：2293445