【摘要】：目的:利用減毒單增李斯特菌作為疫苗載體的優(yōu)勢(shì),擬構(gòu)建基于載體減毒單增李斯特菌的弧菌疫苗菌株。方法:使用單增李斯特菌表達(dá)載體p ERL3過表達(dá)弧菌中共同的靶標(biāo)抗原Ompk;利用PCR和RT-PCR技術(shù)分別對(duì)過表達(dá)菌株鑒定和抗原基因的檢測(cè)。結(jié)果:PCR結(jié)果顯示成功構(gòu)建3株Ompk過表達(dá)菌株Lm-Ompk(L-O)、Lm-Lmo0576-Ompk(L-L-O)和Lm-P-Ompk(L-P-O);測(cè)序結(jié)果顯示過表達(dá)菌株中外源基因的序列與NCBI結(jié)果相似性為100%;RT-PCR結(jié)果顯示Ompk基因在3株過表達(dá)菌株中的轉(zhuǎn)錄水平均極為顯著(P0.001);在抗生素條件下,Ompk基因在各過表達(dá)菌株中的表達(dá)水平顯著高于在非抗性條件下的轉(zhuǎn)錄水平(P0.05)。結(jié)論:成功構(gòu)建了3株基于載體減毒單增李斯特菌的弧菌疫苗菌株,弧菌中共同的靶標(biāo)抗原Ompk在3株重組菌株中均可以穩(wěn)定表達(dá)。
[Abstract]:Aim: to construct vibrio vaccine strain based on attenuated Listeria monocytogenes. Methods: Ompk;, a common target antigen of vibrio sp. ERL3, was used to identify the overexpression strain and detect the antigen gene by PCR and RT-PCR techniques respectively. Results: PCR results showed that three Ompk overexpression strains Lm-Ompk (L-O), Lm-Lmo0576-Ompk (L-O) and Lm-P-Ompk (L-P-O) were successfully constructed, and the similarity between the sequences of the overexpressed genes and NCBI was 100%. RT-PCR showed that Ompk gene was transcribed in the three overexpression strains. The expression level of Ompk gene in the over-expressed strains was significantly higher than that in the non-resistant condition (P0.05). Conclusion: three vibrio vaccine strains based on attenuated listeria monocytogenes were successfully constructed. The common target antigen Ompk of Vibrio could be expressed stably in all three recombinant strains.
【作者單位】： 上海理工大學(xué)醫(yī)療器械與食品學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31371776) 上海市研究生教育創(chuàng)新計(jì)劃資助
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2279485