【摘要】：目的:利用減毒單增李斯特菌作為疫苗載體的優(yōu)勢,擬構建基于載體減毒單增李斯特菌的弧菌疫苗菌株。方法:使用單增李斯特菌表達載體p ERL3過表達弧菌中共同的靶標抗原Ompk;利用PCR和RT-PCR技術分別對過表達菌株鑒定和抗原基因的檢測。結果:PCR結果顯示成功構建3株Ompk過表達菌株Lm-Ompk(L-O)、Lm-Lmo0576-Ompk(L-L-O)和Lm-P-Ompk(L-P-O);測序結果顯示過表達菌株中外源基因的序列與NCBI結果相似性為100%;RT-PCR結果顯示Ompk基因在3株過表達菌株中的轉錄水平均極為顯著(P0.001);在抗生素條件下,Ompk基因在各過表達菌株中的表達水平顯著高于在非抗性條件下的轉錄水平(P0.05)。結論:成功構建了3株基于載體減毒單增李斯特菌的弧菌疫苗菌株,弧菌中共同的靶標抗原Ompk在3株重組菌株中均可以穩(wěn)定表達。
[Abstract]:Aim: to construct vibrio vaccine strain based on attenuated Listeria monocytogenes. Methods: Ompk;, a common target antigen of vibrio sp. ERL3, was used to identify the overexpression strain and detect the antigen gene by PCR and RT-PCR techniques respectively. Results: PCR results showed that three Ompk overexpression strains Lm-Ompk (L-O), Lm-Lmo0576-Ompk (L-O) and Lm-P-Ompk (L-P-O) were successfully constructed, and the similarity between the sequences of the overexpressed genes and NCBI was 100%. RT-PCR showed that Ompk gene was transcribed in the three overexpression strains. The expression level of Ompk gene in the over-expressed strains was significantly higher than that in the non-resistant condition (P0.05). Conclusion: three vibrio vaccine strains based on attenuated listeria monocytogenes were successfully constructed. The common target antigen Ompk of Vibrio could be expressed stably in all three recombinant strains.
【作者單位】： 上海理工大學醫(yī)療器械與食品學院;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(31371776) 上海市研究生教育創(chuàng)新計劃資助
【分類號】：R392

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本文編號：2279485