【摘要】：目的： 精子發(fā)生是男性生殖中的主要過(guò)程，精原細(xì)胞的不斷分裂增殖又保證了精子發(fā)生的順利進(jìn)行。隨著年齡的不斷增長(zhǎng)，男性精子的數(shù)量、質(zhì)量出現(xiàn)下降趨勢(shì)。mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在細(xì)胞增殖分化中發(fā)揮著中心調(diào)控作用，因此mTOR信號(hào)通路可能在精子發(fā)生過(guò)程中有著重要的地位。通過(guò)檢測(cè)mTOR在大鼠睪丸組織中的表達(dá)規(guī)律，探討其與精子發(fā)生的關(guān)系，為進(jìn)一步研究具體機(jī)制打下重要基礎(chǔ)。 方法： 采用免疫組化方法對(duì)mTOR進(jìn)行組織學(xué)定位，RT-PCR方法研究mTOR在SD性成熟雄性大鼠心臟、肝臟、腎臟、腦、睪丸組織中的表達(dá)水平。 利用熒光定量PCR、western blot方法檢測(cè)mTOR在不同發(fā)育階段的SD雄性大鼠睪丸中的表達(dá)情況。用HE染色觀察不同發(fā)育階段過(guò)程中SD大鼠睪丸組織形態(tài)學(xué)上的改變。 構(gòu)建雷帕霉素SD大鼠模型，用熒光定量PCR檢測(cè)mTOR mRNA在正常組、雷帕霉素組、對(duì)照組中的表達(dá)情況。再采用western blot方法檢測(cè)mTOR蛋白以及mTOR下游靶蛋白P-P70S6K/P70S6K的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示mTOR陽(yáng)性免疫染色主要位于睪丸生精小管的精母細(xì)胞及少量初級(jí)精母細(xì)胞的胞質(zhì)中。 2、與性成熟SD大鼠的其他各個(gè)主要器官相比，睪丸組織中mTOR的表達(dá)相對(duì)較高。隨著SD大鼠年齡的增長(zhǎng)，，mTOR在睪丸中的表達(dá)逐漸降低，并且伴隨著生精小管空泡化的逐漸產(chǎn)生；mTOR下游靶蛋白P70S6K的磷酸化效率也逐漸降低。 3、雷帕霉素處理SD雄性大鼠后，睪丸中生精小管出現(xiàn)類似老齡鼠的空泡化以及mTOR下游靶蛋白P70S6K的磷酸化效率降低。 結(jié)論 1、我們首次發(fā)現(xiàn)mTOR在大鼠生精小管精母細(xì)胞表達(dá)。 2、隨著年齡的增長(zhǎng)，由于mTOR表達(dá)下降及其對(duì)下游靶蛋白P70S6K的磷酸化能力下降，導(dǎo)致大鼠精子數(shù)量減少、生精小管空泡化增多。 3、mTOR通過(guò)對(duì)P70S6K的磷酸化，調(diào)控促進(jìn)精原細(xì)胞增殖的蛋白合成，從而促進(jìn)精子發(fā)生。
[Abstract]:Objective: spermatogenesis is the main process in male reproduction. The continuous division and proliferation of spermatogonia ensure the smooth progress of spermatogenesis. With the increasing of age, the quantity and quality of male spermatozoa decrease. The signal transduction pathway of mTOR plays a central role in cell proliferation and differentiation. Therefore, mTOR signaling pathway may play an important role in spermatogenesis. The relationship between mTOR and spermatogenesis was studied by detecting the expression of mTOR in rat testis, which laid an important foundation for further study of the specific mechanism. Methods: the expression of mTOR in the heart, liver, kidney, brain and testis of male SD rats was studied by immunohistochemical method. Fluorescence quantitative PCR,western blot was used to detect the expression of mTOR in the testis of SD male rats at different developmental stages. HE staining was used to observe the morphological changes of testis in SD rats during different developmental stages. The rat model of rapamycin SD was established, and the expression of mTOR mRNA in normal group, rapamycin group and control group was detected by fluorescence quantitative PCR. Western blot was used to detect the expression of mTOR protein and mTOR downstream target protein P-P70S6K/P70S6K. Results: 1. Immunohistochemical results showed that mTOR immunoreactive staining was mainly located in spermatocytes of testicular seminiferous tubules and in the cytoplasm of a small number of primary spermatocytes. 2. Compared with the major organs, The expression of mTOR was relatively high in testis. With the age of SD rats, the expression of mTOR in testis gradually decreased, and accompanied by the production of seminiferous tubule vacuolation. The phosphorylation efficiency of P70S6K, the downstream target protein of mTOR, was also decreased. 3After rapamycin was treated with rapamycin, vacuolation of seminiferous tubules in testis and phosphorylation of mTOR downstream target protein P70S6K were observed in testis of male rats. Conclusion 1. We found that mTOR was expressed in spermatocytes of rat seminiferous tubules for the first time. With the increase of age, the expression of mTOR decreased and its phosphorylation ability to downstream target protein P70S6K decreased. The result showed that the number of spermatozoa decreased and the vacuolation of seminiferous tubules increased. 3mTOR promoted spermatogenesis by phosphorylation of P70S6K and regulation of protein synthesis of spermatogonia proliferation.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R321

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9 周婷玉　g品

本文編號(hào)：2250346