【摘要】：目的： 通過構建幽門螺桿菌(Helicobacter pylori, H. pylori)感染C57BL/6小鼠動物模型，檢測NLRP3炎癥復合體信號通路相關分子在小鼠胃組織的表達情況，綜合分析NLRP3炎癥復合體信號通路及其分子在H. pylori感染引起的炎癥反應中的作用。 方法： 將6-8周齡C57BL/6小鼠隨機分為3組，即感染組、對照組和治療組。感染組和對照組小鼠分別以H. pylori和PBS灌胃，1次/48h，共5次。4周后，培養(yǎng)法鑒定H. pylori感染是否成功，并設立治療組，采用三聯(lián)療法對小鼠進行治療，為期1周，治療后4周處死。對照組和感染組小鼠于感染后不同時間點處死，無菌取胃組織和血液進行進一步實驗： (1)HE染色法鑒定感染小鼠胃組織炎癥程度的變化； (2)RT-PCR檢測小鼠胃組織中NLRP3(NACTH domain-leucine-rich repeat-,andPYD-containing protein, NLRP3)、 ASC(apoptosis-associated speck-like proteincontaining a CARD, ASC)、caspase-1(cysteine aspartic acid specific protease-1,Caspase-1)、IL-1β、IL-18、IL-33mRNA的表達情況； (3)ELISA檢測小鼠血清中細胞因子IL-1β、IL-18、IL-33的含量； (4)Western blot檢測小鼠胃組織中Caspase-1的表達情況。 結果： (1)對照組小鼠胃組織正常，，感染組小鼠胃組織炎癥程度隨感染時間的延長而不斷加重，治療組小鼠胃組織炎癥程度明顯減輕； (2)感染組小鼠胃組織中NLRP3炎癥復合體信號通路相關蛋白(NLRP3、ASC、caspase-1)和細胞因子(IL-1β、IL-18、IL-33)mRNA表達水平顯著升高(P0.05)； (3)H. pylori感染的小鼠血清中IL-1β、IL-18、IL-33的表達均顯著增高(P0.05), (4)H. pylori感染的小鼠胃組織中caspase-1的蛋白含量隨感染時間延長而增加； (5)治療組小鼠NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18、IL-33的表達量與治療前相比有所下降。 結論： (1) H. pylori感染后小鼠胃組織中NLRP3炎癥復合體信號通路相關分子表達升高，表明H. pyori感染可以激活NLRP3炎癥復合體信號通路。 (2) H. pylori感染后小鼠的胃炎程度與NLRP3炎癥復合體信號通路相關分子的表達呈正相關。
[Abstract]:Objective: to investigate the expression of NLRP3 inflammatory complex signaling pathway related molecules in gastric tissues of C57BL/6 mice infected with Helicobacter pylori (Helicobacter pylori, H. pylori). The role of NLRP3 inflammatory complex signaling pathway and its molecules in the inflammatory response induced by H. pylori infection was comprehensively analyzed. Methods: C57BL/6 mice aged 6 to 8 weeks were randomly divided into three groups: infection group, control group and treatment group. Mice in infected group and control group were perfused with H. pylori and PBS for 1 / 48 h for 5 times. After 4 weeks, culture method was used to determine the success of H. pylori infection, and the treatment group was set up. The mice were treated with triple therapy for 1 week. The mice were killed 4 weeks after treatment. The mice in the control group and the infected group were killed at different time points after infection, and the gastric tissue and blood were collected aseptically for further experiments: (1) HE staining method was used to identify the degree of inflammation in the gastric tissue of the infected mice; (2) RT-PCR was used to detect the expression of NLRP3 (NACTH domain-leucine-rich repeat-,andPYD-containing protein, NLRP3), ASC (apoptosis-associated speck-like proteincontaining a CARD, ASC) caspase-1 (cysteine aspartic acid specific protease-1,Caspase-1) interleukin-18 (IL-33) mRNA in mouse gastric tissue, (3) ELISA was used to detect the content of IL-18 IL-33 in serum of mice. (4) Western blot was used to detect the expression of Caspase-1 in gastric tissues of mice. Results: (1) the gastric tissue in the control group was normal, and the degree of gastric inflammation in the infected group was aggravated with the prolongation of the infection time, and the degree of gastric inflammation in the treatment group was obviously reduced. (2) the expression of NLRP3 signaling pathway related protein (NLRP3,ASC,caspase-1) and cytokine (IL-1 尾 -IL-18 IL-33) in gastric tissues of infected mice were significantly increased (P0.05). (3) the expression of IL-18 IL-33 in serum of mice infected with) H. pylori increased significantly (P0.05) the protein content of caspase-1 in gastric tissues of mice infected with), (4) H. pylori increased with the time of infection. (5) the expression of NLRP3,ASC,caspase-1,IL-1 尾 -IL-18 + IL-33 in treatment group was lower than that before treatment. Conclusion: (1) after) H. pylori infection, the expression of NLRP3 inflammatory complex signal pathway related molecules in the gastric tissues of mice was increased. The results indicated that H. pyori infection could activate the NLRP3 inflammatory complex signaling pathway. (2) the degree of gastritis in mice after) H. pylori infection was positively correlated with the expression of NLRP3 inflammatory complex signal pathway related molecules.
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R-332

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本文編號：2243861