發(fā)布時(shí)間：2018-09-11 17:07

【摘要】：目的以重組的博爾納病病毒(BDV)磷蛋白(p24)為免疫原制備單克隆抗體,并鑒定其特異性。方法以純化后的重組BDVp24免疫小鼠,將骨髓瘤細(xì)胞與其脾細(xì)胞進(jìn)行融合,經(jīng)ELISA法篩選出分泌抗p24單抗的細(xì)胞株,并對(duì)其進(jìn)行克隆與亞克隆培養(yǎng),將最終獲得的其中2株細(xì)胞株分別注入小鼠腹腔制備單抗,經(jīng)親和純化法純化后,采用ELISA法測(cè)定效價(jià),利用蛋白免疫印跡和免疫熒光鑒定其特異性。結(jié)果建立了2株穩(wěn)定分泌抗p24單抗的雜交瘤細(xì)胞株,抗體亞類(lèi)均為IgG1型。純化后的腹水抗p24單抗純度為98%和93%,ELISA效價(jià)在1∶81 000以上,該抗體均能識(shí)別重組p24蛋白和BDV感染人類(lèi)少突膠質(zhì)細(xì)胞(Oligodendroglia cell,OL細(xì)胞)所表達(dá)的p24蛋白。結(jié)論成功制備了靈敏性高、特異性好的抗BDVp24單抗,為博爾納病病毒診斷方法的研制及感染機(jī)理的研討提供依據(jù)。
[Abstract]:Objective to prepare monoclonal antibody against recombinant (BDV) phosphorous protein (p24) of Borna disease virus and identify its specificity. Methods mice were immunized with purified recombinant BDVp24, and myeloma cells were fused with spleen cells. The cell lines secreting anti-p24 monoclonal antibody were screened by ELISA method, and were cloned and subcloned. The final two cell lines were injected into mouse abdominal cavity to prepare monoclonal antibody. After purification by affinity purification, the titers were determined by ELISA method. The specificity of McAb was identified by Western blot and immunofluorescence. Results two hybridoma cell lines secreting anti-p24 McAb stably were established. The antibody subclasses were all of IgG1 type. The purity of purified ascites anti p24 monoclonal antibody was 98% and the titer of Elisa was more than 1:81. The antibody could recognize the p24 protein expressed by recombinant p24 protein and human oligodendrocyte (Oligodendroglia cell,OL) cells infected with BDV. Conclusion A highly sensitive and specific monoclonal antibody against BDVp24 was successfully prepared, which provides a basis for the development of the diagnostic method of Borna disease virus and the study of infection mechanism.
【作者單位】： 重慶三峽醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)�；A(chǔ)醫(yī)學(xué)部;重慶醫(yī)科大學(xué)神經(jīng)科學(xué)研究中心;重慶三峽中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃,No.2009CB918300)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R392-33

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本文編號(hào)：2237316