【摘要】：目的對人源化抗肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)單克隆抗體進行初步鑒定,并對其體內(nèi)、外抗腫瘤活性及藥代動力學特征進行研究。方法將基因工程技術制備的2株抗HGF人源化單克隆抗體HE19-12和HD19-27,通過UV、SDS-PAGE方法對其質(zhì)量濃度、相對分子質(zhì)量及純度進行鑒定;MTT法評價抗體對人腦膠質(zhì)瘤U87MG細胞的增殖抑制活性,并比較抗體人源化前后活性差異;采用ELISA法評價抗體結合HGF及競爭抑制HGF與受體結合的能力;Transwell法研究抗體對HGF促進PC-3細胞遷移的抑制能力;通過構建U87MG裸鼠移植瘤模型,比較抗體在體內(nèi)的抗腫瘤作用;抗體通過靜脈給予正常小鼠,分析其藥代動力學特征。結果 2株抗體單體純度均達到90%以上,均可抑制U87MG腫瘤細胞增殖,且人源化前后抗體活性差異不大。2株抗體均與HGF具有較強的結合能力,且可競爭抑制HGF與其受體C-Met的結合。細胞遷移實驗顯示,2株抗體具有抑制HGF促腫瘤細胞遷移的能力。裸鼠移植瘤試驗顯示HGF抗體可有效抑制腫瘤的生長,其中HE19-12在試驗中顯示更好的抗腫瘤活性。小鼠藥代結果顯示,HE19-12和HD19-27的半衰期分別為423.3 h和342.5 h。結論成功對制備出的2株人源化單克隆抗體進行初步鑒定及一系列抗腫瘤活性研究,證明具有較強抗腫瘤活性的HGF中和抗體,且具有良好的藥代動力學特征,為HGF/C-Met靶點抗腫瘤藥物的開發(fā)奠定基礎。
[Abstract]:Objective to identify the anti-hepatocyte growth factor (hepatocyte growth) monoclonal antibody and to study its antitumor activity and pharmacokinetics in vitro and in vivo. Methods HE19-12 and HD19-27 monoclonal antibodies against HGF were prepared by genetic engineering technique. The mass concentration, relative molecular weight and purity of the two monoclonal antibodies against human glioma U87MG cells were evaluated by UVX SDS-PAGE method to evaluate the inhibitory activity of the antibodies on the proliferation of human glioma U87MG cells. The activity of antibody before and after humanization was compared, and the ability of antibody binding to HGF and competitive inhibition of HGF binding to receptor was evaluated by ELISA method. Transwell method was used to study the inhibitory effect of antibody on the migration of PC-3 cells induced by HGF. The antitumor effect of antibody in vivo was compared, and the pharmacokinetic characteristics of the antibody were analyzed by intravenous administration of the antibody to normal mice. Results the purity of the two antibody monomers was over 90%, which could inhibit the proliferation of U87MG tumor cells. The antibody activity of the two strains had no significant difference before and after humanization. The antibody activity of both strains had strong binding ability to HGF, and could compete to inhibit the binding of HGF to its receptor C-Met. Cell migration assay showed that two strains of antibodies could inhibit the migration of tumor cells induced by HGF. Tumor transplantation test in nude mice showed that HGF antibody could effectively inhibit tumor growth, and HE19-12 showed better antitumor activity in the experiment. The pharmacokinetic results showed that the half-lives of HE19-12 and HD19-27 were 423.3 h and 342.5 h, respectively. Conclusion two humanized monoclonal antibodies were successfully identified and a series of antitumor activities were studied. The results showed that HGF neutralizing antibodies had strong anti-tumor activity and had good pharmacokinetic characteristics. To lay a foundation for the development of anti-tumor drugs targeting HGF/C-Met.
【作者單位】： 北京工業(yè)大學生命科學與生物工程學院;神州細胞工程有限公司;
【分類號】：R392.11

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本文編號：2195051