發(fā)布時間：2018-08-19 13:56

【摘要】：目的：分泌蛋白Equ c1是一種主要過敏原，能夠在大多數(shù)對馬過敏的病人體內誘發(fā)IgE調節(jié)的I型過敏反應，本文旨在探索重組低變應原性過敏原Equ c1的研究，為其在特異性免疫治療方面的應用打下基礎。方法：本研究在大腸桿菌中重組表達了經(jīng)密碼子優(yōu)化之后的成熟肽區(qū)段的Equ c1，并對其進行表達條件的優(yōu)化，親和純化和Western-Blot鑒定。利用MHCⅡ Service2.0軟件對Equ c1的T細胞主要過敏原表位進行預測，用定點突變技術改變Equ c1編碼特定氨基酸的密碼子，，并在大腸桿菌中表達具有低抗原表位的重組蛋白，對其進行了三級結構的模擬和分析以及Western-Blot鑒定。結果：重組Equ c1-Rosetta菌株在加入濃度為1mmol/L的IPTG誘導劑0.5μL，37℃誘導表達6h條件下，能取得最優(yōu)的蛋白表達效果；重組Equ c1蛋白的SDS-PAGE鑒定結果顯示，目的條帶在22KDa的位置，純化洗脫中峰和洗脫后峰得到了比較純的目的蛋白。通過對三個高抗原表位進行單位點突變和組合突變，共表達一種重組Equ c1蛋白和7種突變的Equ c1蛋白。結論：改造之后，第50、120、153三個抗原性最高的九肽與MHCⅡ類分子結合力都降低到了0.42以下，達到了我們預期的效果。三級結構模擬結果顯示，位點突變前后，蛋白的三級結構均沒有發(fā)生明顯變化。利用StrepII tag的Western-Blot結果表明純化后的重組蛋白與突變蛋白均為目的蛋白。
[Abstract]:Objective: the secretory protein Equ C1 is a major allergen, which can induce type I allergic reaction regulated by IgE in most patients with horse allergy. The aim of this study was to explore the recombinant low allergen Equ C1. To lay a foundation for its application in specific immunotherapy. Methods: in this study, we expressed Equ C1 of mature peptide region after codon optimization in Escherichia coli, and optimized the expression conditions, affinity purification and Western-Blot identification. The T cell epitopes of Equ C1 were predicted by MHC 鈪

本文編號：2191859