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hTERT多表位肽致敏mDC誘導(dǎo)CTL對HLA-A24陽性腫瘤細(xì)胞殺傷效應(yīng)的研究

發(fā)布時間:2018-08-11 15:16
【摘要】:目的:研究人工合成人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)多表位混合肽(MAPs)經(jīng)髓樣樹突狀細(xì)胞(mDC)攝取、提呈后,誘導(dǎo)特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)對HLA-A24陽性腫瘤細(xì)胞的免疫殺傷效應(yīng)。 方法:人工合成四分支的樹狀串聯(lián)hTERT表位肽(MAPs)及其各單表位多肽。取HLA-A24陽性健康志愿者的外周血,用免疫磁珠法分選并培養(yǎng)mDC。用尼龍毛柱法純化T淋巴細(xì)胞并培養(yǎng)。以各表位肽致敏mDC后,誘導(dǎo)特異性CTL增殖,并以表達(dá)hTERT且以HLA-A24陽性腫瘤細(xì)胞株及HLA-A2/24雙陰性腫瘤細(xì)胞株為靶細(xì)胞行殺傷實(shí)驗(yàn)。用ELISA法檢測不同時間點(diǎn)培養(yǎng)基上清液中IL-12、TNF-α的分泌量;用流式細(xì)胞術(shù)檢測CTL對腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷效應(yīng)。 結(jié)果:以源于hTERT的T淋巴細(xì)胞表位I540(ILAKFLHWL)、V461(VYGFVRACL)及L766(LTDLQPYMRQFVAHL)合成4分支MAPs多肽及各單表位混合多肽。外周血單個核細(xì)胞經(jīng)免疫磁珠法陰性分選后可得到mDC(72.59%),刺激成熟后的mDC高表達(dá)MHC-I類分子(91.08%)、MHC-II類分子(83.90%),及共刺激分子CD86(77.13%)、CD83(92.16%)。以人工合成的hTERT多表位混合肽致敏mDC后,能有效刺激CTL增殖,并可誘導(dǎo)對HLA-A24陽性腫瘤細(xì)胞株的特異性殺傷作用,且MAPs多肽較單表位混合多肽的致敏效果更具顯著性(P0.05),相同條件下,CTL對HLA-A2/24雙陰性腫瘤細(xì)胞株無顯著性殺傷效應(yīng)。 結(jié)論:以人工合成的hTERT多表位混合肽致敏mDC后能有效誘導(dǎo)CTL的產(chǎn)生,并可特異性殺傷HLA-A24陽性的腫瘤細(xì)胞,在腫瘤免疫治療中具有重要的意義。
[Abstract]:Aim: to study the immunoreactivity of human telomerase reverse transcriptase (hTERT) multiepitope mixed peptide (MAPs) (MAPs) on HLA-A24 positive tumor cells induced by specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) (CTL) after (mDC) uptake by myeloid dendritic cells (MDC). Methods: four branched dendritic tandem hTERT epitope peptide (MAPs) and its single epitope peptides were synthesized. The peripheral blood of healthy volunteers with positive HLA-A24 was isolated and cultured by immunomagnetic beads. T lymphocytes were purified and cultured by nylon hair column method. The specific CTL proliferation was induced by sensitizing mDC with various epitope peptides, and the target cells were HLA-A24 positive tumor cell lines and HLA-A2/24 double negative tumor cell lines, and the target cells were HLA-A24 positive tumor cells and HLA-A2/24 double negative tumor cell lines. The secretion of IL-12 TNF- 偽 in supernatant of medium at different time points was detected by ELISA method, and the specific killing effect of CTL on tumor cells was detected by flow cytometry. Results: four branched MAPs peptides and mixed monoepitope peptides were synthesized from the T lymphocyte epitope I540 (ILAKFLHWL) hV461 (VYGFVRACL) and L766 (LTDLQPYMRQFVAHL) derived from hTERT. MDC (72.59%) was obtained by immunomagnetic bead negative sorting in peripheral blood mononuclear cells (PBMC). The high expression of MHC-I class II molecules (91.08%) and costimulatory molecule CD86 (77.13%) CD83 (92.16%) were obtained in mature mononuclear cells (91.08%) and costimulator CD86 (77.13%) respectively. Sensitizing mDC with synthetic hTERT polyepitope mixed peptide could effectively stimulate the proliferation of CTL and induce the specific killing effect on HLA-A24 positive tumor cell line. The sensitizing effect of MAPs polypeptide was more significant than that of mono-epitope mixed polypeptide (P0.05). Under the same condition, MAPs had no significant killing effect on HLA-A2/24 double-negative tumor cell line. Conclusion: sensitizing mDC with synthetic polypeptide of hTERT multiepitope can effectively induce the production of CTL and can specifically kill HLA-A24 positive tumor cells. It is of great significance in tumor immunotherapy.
【學(xué)位授予單位】:重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2011
【分類號】:R392

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