【摘要】：目的：觀察高滲透壓對體外培養(yǎng)的兔髓核細(xì)胞凋亡的影響及細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK1/2)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在此過程中的作用。 方法：用不同的滲透壓梯度以及ERK1/2特異性抑制劑PD98059(50μM)分不同作用時間處理髓核細(xì)胞；流式細(xì)胞儀檢測髓核細(xì)胞在不同處理組的凋亡情況,蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)檢測各組ERK1/2和p-ERK1/2蛋白的表達(dá)情況；免疫熒光標(biāo)記技術(shù)檢測p-ERK1/2蛋白在髓核細(xì)胞內(nèi)的分布情況。 結(jié)果：高滲透壓(600mOsm)培養(yǎng)基中兔髓核細(xì)胞凋亡顯著增加,與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.013),并呈時間依賴性；PD98059預(yù)處理組與相應(yīng)時間段同滲透壓組相比,細(xì)胞凋亡進(jìn)一步顯著地增加(P=0.035)；400mOsm組及其抑制組在各時間段細(xì)胞凋亡均不明顯；600mOsm高滲透壓顯著激活p-ERK1/2的表達(dá),并且在3h組表達(dá)水平最高,與對照組比較差異顯著(P=0.027),而PD98059幾乎阻斷p-ERK1/2的表達(dá)；免疫熒光標(biāo)記檢測到p-ERK1/2在600mOsm高滲組的細(xì)胞胞漿和胞核中均有分布。 結(jié)論：體外培養(yǎng)的兔髓核細(xì)胞能適應(yīng)輕度增加的滲透壓(400mOsm)環(huán)境,而高滲透壓(600mOsm)應(yīng)激下可顯著誘導(dǎo)其凋亡,PD98059特異性抑制高滲透壓應(yīng)激誘導(dǎo)的短暫的ERKl/2激活并進(jìn)一步明顯誘導(dǎo)兔髓核細(xì)胞的凋亡,高滲透壓應(yīng)激誘導(dǎo)激活的ERKl/2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路具有抑制兔髓核細(xì)胞凋亡的作用。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of high osmotic pressure on apoptosis of cultured rabbit nucleus pulposus cells and the role of extracellular signal regulated kinase (ERK1/2) signal transduction pathway in the process. Methods: the nucleus pulposus cells were treated with different osmotic pressure gradient and PD98059 (50 渭 M), a specific inhibitor of ERK1/2, and the apoptosis of nucleus pulposus cells in different treatment groups was detected by flow cytometry. The expression of ERK1/2 and p-ERK1/2 protein was detected by Western blot and the distribution of p-ERK1/2 protein in nucleus pulposus cells was detected by immunofluorescence labeling. Results: the apoptosis of rabbit nucleus pulposus cells in high osmotic pressure (600mOsm) medium was significantly increased compared with the control group (P0. 013). Apoptosis was further significantly increased in the 400mOsm group and its inhibitory group. The high osmotic pressure of 600mOsm did not significantly activate the expression of p-ERK1/2, and the highest expression level was observed in the 3h group. Compared with the control group, the expression of p-ERK1/2 was almost blocked by PD98059, and the distribution of p-ERK1/2 in cytoplasm and nucleus of 600mOsm hypertonic group was detected by immunofluorescence labeling. Conclusion: cultured rabbit nucleus pulposus cells can adapt to slightly increased osmotic pressure (400mOsm) environment. However, high osmotic pressure (600mOsm) stress could induce apoptosis of PD98059, specifically inhibit transient ERKl/2 activation induced by high osmotic stress and further induce apoptosis of rabbit nucleus pulposus cells. High osmotic stress induced activation of ERKl/2 signal transduction pathway can inhibit the apoptosis of rabbit nucleus pulposus cells.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R363

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本文編號：2168001