【摘要】：【目的】 體外培養(yǎng)獲得足夠數(shù)量的臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)并對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)分化,應(yīng)用胰島素樣生長因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)、新生大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞?Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細(xì)胞(oligodendrocyte?typeⅡastrocyte,O2A祖細(xì)胞,也稱少突膠質(zhì)祖細(xì)胞)培養(yǎng)上清液共培養(yǎng)等方法提高誘導(dǎo)分化的效率,在體外培養(yǎng)獲得更多的少突膠質(zhì)細(xì)胞,為少突膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)疾病的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 【方法】 1.無菌條件下收集新生兒臍血,以Ficon-HyPaque淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行密度梯度離心,分離的單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)傳代擴(kuò)增,獲得第3代純化的臍血MSCs,流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定表面抗原并向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化測(cè)定其多向分化能力。 2. bFGF、IGF-1、新生大鼠O2A祖細(xì)胞培養(yǎng)上清液聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)臍血MSCs向少突膠質(zhì)樣細(xì)胞分化,并通過熒光倒置顯微鏡及Western blot法對(duì)成功誘導(dǎo)為OL的細(xì)胞進(jìn)行陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)與Galc的定量檢測(cè),檢測(cè)新生大鼠O2A祖細(xì)胞培養(yǎng)上清液是否可提高IGF-1誘導(dǎo)的效率。 【結(jié)果】 1.貼壁細(xì)胞傳至第3代后可獲得均一的梭形細(xì)胞,生長有一定方向性,平行排列或旋渦狀生長,細(xì)胞生長速度明顯加快,2周即可達(dá)80%融合,表現(xiàn)出較強(qiáng)生長傳代能力。流式細(xì)胞術(shù)鑒定不表達(dá)或極弱表達(dá)造血細(xì)胞標(biāo)志物CD34、CD45,穩(wěn)定地表達(dá)間充質(zhì)細(xì)胞相關(guān)的表面抗原CD44、CD105;利用成脂誘導(dǎo)劑可誘導(dǎo)其向脂肪細(xì)胞分化。 2.誘導(dǎo)約10d左右,可以看到貼壁細(xì)胞呈現(xiàn)不同狀態(tài):可見具有兩個(gè)對(duì)稱或三個(gè)小突起的少突膠質(zhì)前體細(xì)胞以及圓形的未分化細(xì)胞;約3周時(shí),可見細(xì)胞突起增加,并可相互連接,呈現(xiàn)少突膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)。實(shí)驗(yàn)組3(基礎(chǔ)培養(yǎng)基+ 10ng/mL bFGF +10ng/mL IGF-1)與陰性對(duì)照組(無bFGF、無IGF-1)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05),其余各組與陰性對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㧐0.05)。 3.實(shí)驗(yàn)組A(10ng/mL IGF-1)、實(shí)驗(yàn)組B(培養(yǎng)上清液)Galc表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㧐0.05);實(shí)驗(yàn)組A、實(shí)驗(yàn)組C(培養(yǎng)上清液+10ng/mL IGF-1)Galc表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05);實(shí)驗(yàn)組B、C Galc表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05)。 【結(jié)論】 1通過密度梯度離心獲得單個(gè)核細(xì)胞連續(xù)傳代培養(yǎng),可獲得純度較高的間充質(zhì)干細(xì)胞。 2臍血MSCs在bFGF、IGF-1的聯(lián)合作用下可向少突膠質(zhì)細(xì)胞分化,但誘導(dǎo)分化的效率較低,且其生理學(xué)活性還需進(jìn)一步檢測(cè)。 3不同濃度的誘導(dǎo)劑影響誘導(dǎo)的效率,選擇合適的誘導(dǎo)濃度是誘導(dǎo)成功的關(guān)鍵,本實(shí)驗(yàn)顯示,10ng/mL bFGF、10ng/mL IGF-1有較好的誘導(dǎo)效果。新生大鼠O2A祖細(xì)胞培養(yǎng)上清液可提高IGF-1誘導(dǎo)分化的效率。
[Abstract]:[objective] to obtain enough (mesenchymal stem cells from umbilical cord blood mesenchymal stem cells in vitro and to induce their differentiation. Insulin-like growth factor-1 (IGF-1) and supernatant co-culture of oligodendrocyte type 鈪，

本文編號(hào)：2156295