【摘要】：目的本研究采用重組酶介導的等溫核酸擴增方法(RAA),通過使用逆轉錄酶,建立黃熱病毒的一步法等溫核酸擴增(RT-RAA)方法。方法根據(jù)黃熱病毒基因組保守序列設計引物和探針,建立并分析RT-RAA的重復性、特異性、靈敏度;以所建立方法對黃熱病毒樣本進行檢測,同時以基因測序進行驗證。結果黃熱病毒RT-RAA擴增,體系中加入40 U的逆轉錄酶擴增效果最佳。該方法檢測時間短(20 min),并且靈敏度高,檢測下限可達100 copy,與登革病毒、西尼羅病毒、日本乙型腦炎病毒、基孔肯雅熱病毒等蚊媒病毒無交叉反應,具有良好的特異性。結論構建的黃熱病毒RT-RAA方法具有快速、特異以及靈敏的特點,適應于黃熱病毒的口岸快速檢測。
[Abstract]:Objective to establish a one step isothermal nucleic acid amplification (RT-RAA) method for yellow fever virus by means of recombinant enzyme mediated isothermal nucleic acid amplification (RAA),). Methods primers and probes were designed according to the conserved sequence of yellow fever virus genome to establish and analyze the repeatability, specificity and sensitivity of RT-RAA. Results the RT-RAA amplification of yellow fever virus was the best when 40 U reverse transcriptase was added into the system. The detection time is short (20 min), sensitivity is high, the detection limit is up to 100copy.There is no cross reaction with dengue virus, West Nile virus, Japanese encephalitis virus, Kikungunya fever virus and other mosquito-borne viruses), so it has good specificity. Conclusion the RT-RAA method of yellow fever virus is rapid, specific and sensitive, which is suitable for rapid detection of yellow fever virus at port.
【作者單位】： 浙江國際旅行衛(wèi)生保健中心;西藏國際旅行衛(wèi)生保健中心;江蘇奇天基因生物科技有限公司;
【基金】：國家質檢總局科技計劃項目(2014IK062) 浙江出入境檢驗檢疫局科技計劃項目(ZK2014034)
【分類號】：R392

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本文編號：2152152