【摘要】：實驗目的： 研究PPARγ激動劑和全反式維甲酸對間充質(zhì)干細胞骨向分化的影響及可能機制。 實驗方法： 采用化學發(fā)光法、PCR、Western blot、報告質(zhì)粒等技術(shù),研究PPARγ受體激動劑曲格列酮與全反式維甲酸對間充質(zhì)干細胞骨向分化的影響。具體方法如下： 1.檢測單獨及聯(lián)合使用曲格列酮(Tro)和/或全反式維甲酸(ATRA)后,早期成骨指標堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)的活性變化。 2.檢測單獨及聯(lián)合使用Tro和/或ATRA后,礦化基質(zhì)沉積的變化。 3.從基因表達水平和蛋白質(zhì)表達水平檢測單獨及聯(lián)合使用Tro和/或ATRA后,MEFs細胞成骨晚期指標骨橋素(osteopontin, OPN),骨鈣素(osteocalcin, OC)的表達情況。 4.利用重組腺病毒技術(shù),過表達及干擾PPARy2基因,檢測Tro和/或ATRA對MEFs細胞堿性磷酸酶活性的影響。 5.利用報告質(zhì)粒及Western blot,檢測使用Tro和/或ATRA對BMPR-Smad信號通路轉(zhuǎn)錄活性的影響。 6.利用Oil-red染色及Western blot,檢測Tro和/或ATRA對MEFs細胞成脂分化的影響。 實驗結(jié)果： 1.Tro和ATRA聯(lián)合應用增強MEFs細胞ALP活性。 2.Tro和ATRA聯(lián)合應用增強MEFs細胞礦化基質(zhì)沉積。 3.Tro和ATRA聯(lián)合應用增加MEFs細胞OPN及OC的表達。 4.過表達PPAR/2基因,可以增強Tro和ATRA聯(lián)合誘導的MEFs細胞ALP活性。 5.Tro和ATRA聯(lián)合應用能激活BMPR-Smad信號通路。 6.Tro和ATRA聯(lián)合應用能抑制Tro誘導MEFs細胞成脂分化。 實驗結(jié)論： Tro與ATRA聯(lián)合應用能明顯誘導MEFs細胞成骨分化。這種作用可能與增強BMPR-Smad信號轉(zhuǎn)錄活性及抑制MEFs細胞成脂分化有關(guān),具體機制有待進一步研究。
[Abstract]:Aim: to study the effect of PPAR 緯 agonist and all trans retinoic acid on bone differentiation of mesenchymal stem cells and its possible mechanism. Methods: the effects of trasiglitazone, a PPAR 緯 receptor agonist, and all trans retinoic acid on bone differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) were studied by chemiluminescent technique. The specific methods are as follows: 1. The activity of alkaline phosphatase (alkaline phosphatase, ALP), an early osteogenic index, was detected after trioglitazone (Tro) and / or all trans retinoic acid (ATRA) were used alone or in combination. 2. The changes of mineralized matrix deposition after using Tro and / or ATRA alone and in combination were detected. 3. 3%. The expression of osteopontin (osteopontin, OPN),) and osteocalcin (osteocalcin, OC) in Tro and / or ATRA cells were detected by gene expression level and protein expression level. 4. The effects of Tro and / or ATRA on alkaline phosphatase activity in MEFs cells were detected by overexpressing and interfering with PPARy2 gene by recombinant adenovirus technique. The effects of Tro and / or ATRA on the transcriptional activity of BMPR-Smad signaling pathway were detected by using reporter plasmids and Western blotts. The effects of Tro and / or ATRA on the adipogenic differentiation of MEFs cells were detected by Oil-red staining and Western blot. The results showed that the combination of 1.Tro and ATRA enhanced the ALP activity of MEFs cells, 2.Tro and ATRA enhanced the deposition of mineralized matrix of MEFs cells, and 3.Tro and ATRA increased the expression of OPN and OC in MEFs cells. Overexpression of PPAR/2 gene could enhance the ALP activity of MEFs cells induced by Tro and ATRA. The combination of 5.Tro and ATRA could activate BMPR-Smad signaling pathway. 6.Tro and ATRA combined with ATRA could inhibit Tro induced MEFs cell adipogenic differentiation. Conclusion: the combination of Tro and ATRA can induce the osteogenic differentiation of MEFs cells. This effect may be related to enhancing the transcriptional activity of BMPR-Smad signal and inhibiting the adipogenic differentiation of MEFs cells.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R329.2

【共引文獻】

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本文編號：2141803