【摘要】：目的:在HEK293細(xì)胞中獲得Skp2全長基因,構(gòu)建其高效真核表達載體。方法:提取人HEK293細(xì)胞總RNA,反轉(zhuǎn)錄合成c DNA,以特異性引物擴增Skp2全長基因并克隆入p Babe載體,篩選陽性克隆進行序列測定后,鑒定其表達情況。結(jié)果:PCR擴增得到特異性的約1300 bp的片段,序列測定結(jié)果表明與國外已發(fā)表的序列完全一致;將構(gòu)建的p Babe-Skp2質(zhì)粒轉(zhuǎn)入HEK293細(xì)胞,與空質(zhì)粒對照相比,Skp2的m RNA和蛋白表達水平均提高,并且p27蛋白水平降低。結(jié)論:構(gòu)建獲得Skp2基因高效真核表達載體,將用于Skp2的功能研究。
[Abstract]:Aim: to construct an efficient eukaryotic expression vector of Skp2 gene from HEK293 cells. Methods: total RNAs were extracted from human HEK293 cells, and c DNA was synthesized by reverse transcription. Skp2 full-length gene was amplified by specific primers and cloned into pBabe vector. After screening positive clones for sequencing, the expression of Skp2 gene was identified. Results the specific fragment of about 1300 BP was amplified by 1% PCR, and the sequence analysis showed that it was identical with the published sequence, and the expression level of mRNAs and proteins of pBabe-Skp2 was increased compared with that of blank plasmid, and the pBabe-Skp2 plasmid was transformed into HEK293 cells. And the level of p27 protein decreased. Conclusion: the efficient eukaryotic expression vector of Skp2 gene was constructed and used in the functional study of Skp2.
【作者單位】： 陜西中醫(yī)藥大學(xué);青島大學(xué)附屬醫(yī)院;第四軍醫(yī)大學(xué);
【分類號】：Q78;R3416

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本文編號：2129885