【摘要】：目的:在線預(yù)測(cè)肽聚糖(PGN)模擬抗表原位并鑒定其抗原性。方法:利用抗PGN單克隆抗體從12線性噬菌體隨機(jī)展示肽庫(kù)中篩選模擬PGN表位的陽(yáng)性克隆,對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行DNA測(cè)序和推導(dǎo)氨基酸序列,結(jié)合生物信息學(xué)分析陽(yáng)性序列GRWxHxVxWAGL的抗原性以及T細(xì)胞表位,根據(jù)分析對(duì)陽(yáng)性序列進(jìn)行修飾與合成,ELISA法鑒定陽(yáng)性序列的抗原性。結(jié)果:經(jīng)對(duì)噬菌體12線性肽庫(kù)的3輪篩選,夾心ELISA鑒定得到16個(gè)與抗PGN單克隆抗體結(jié)合的克隆,DNA測(cè)序并推導(dǎo)氨基酸序列,該序列與前期具有抗金黃色葡萄球菌活性序列No.31(ATWxHxLxSAGL)含有保守序列WxHx…AGL。在線分析(http://bio.dfci.harvard.edu/Tools/antigenic.pl,www.syfpeithi.de,http://www.darrenflower.info/mhcpred)表明,含保守序列的陽(yáng)性序列GRWxHxVxWAGL包含與人和小鼠MHC結(jié)合表位(-WxHxVxW-),C端加入AGGS后具有T細(xì)胞表位(DNAstar),據(jù)此合成線性肽Biotin-GRWxHxVxWAGLAGGS(命名為SP39)。ELISA結(jié)果顯示,SP39能與抗PGN單抗及抗S.aureus全菌多抗結(jié)合,PGN能抑制SP39與抗PGN單克隆抗體結(jié)合。結(jié)論:經(jīng)噬菌體肽庫(kù)篩選獲得陽(yáng)性序列GRWxHxVxWAGLAGGS,該序列可能模擬PGN抗原表位。
[Abstract]:Objective: to predict the antigenicity of peptidoglycan (PGN) in situ. Methods: the positive clones of PGN epitope were screened from 12 linear phage display peptide library using anti-PGN monoclonal antibody. The positive clones were sequenced and deduced amino acid sequences. Combined with bioinformatics to analyze the antigenicity and T cell epitope of GRWxHxVxWAGL, the positive sequence was modified and the antigenicity of the positive sequence was identified by synthetic Elisa. Results: after three rounds of screening of phage 12 linear peptide library, 16 clones were identified by sandwich Elisa, which combined with anti-PGN monoclonal antibody and deduced amino acid sequence. This sequence contains conserved sequence WxHx with previous antiStaphylococcus aureus active sequence No.31 (ATWxHxLxSAGL). AGL. The online analytics (http:% -bio.dfci.harvard.edur / tools / antigenic.plnn www.syfpeithi.deu httpw / r / www.darrenflower.info-mhcpred) shows that, The positive sequence GRWxHxVxWAGL containing conserved sequence contains T-cell epitope (DNAstar) after the C-terminal of human and mouse MHC binding epitope (-WxHxVxW-) is added to AGGS. According to this, the linear peptide Biotin-GRWxHxVxWAGLAGGS (named SP39). Elisa results show that SP39 can bind PGN with anti-PGN monoclonal antibody and anti-S.aureus polyclonal antibody. It can inhibit the binding of SP39 to anti PGN monoclonal antibody. Conclusion: the positive sequence GRWxHxVxWAGLAGGSs was obtained by phage peptide library screening, which may mimic the PGN epitope.
【作者單位】： 江西省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫教研室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31270980) 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(A2016533)資助
【分類(lèi)號(hào)】：R392-33

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