【摘要】：目的克隆人細胞角蛋白CK9的cDNA,通過原核表達系統(tǒng)表達融合蛋白并進行純化和鑒定。方法從人角質(zhì)形成細胞系(HaCaT)中提取RNA,以RT-PCR反轉(zhuǎn)錄cDNA,使用特異性引物PCR擴增出人CK9編碼區(qū)全長并克隆到pET-28a載體上,再用IPTG誘導(dǎo)融合蛋白his-CK9的表達。表達的融合蛋白通過Ni 2+親和層析純化后,進行SDS-PAGE和Western blot鑒定。結(jié)果測序鑒定構(gòu)建表達載體中CK9的cDNA序列正確;融合蛋白his-CK9可在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達;純化的融合蛋白his-CK9純度較高;純化的融合蛋白his-CK9可與商品化CK9抗體特異性結(jié)合。結(jié)論成功構(gòu)建原核表達載體pET-28a-CK9,并成功誘導(dǎo)及純化融合蛋白his-CK9。
[Abstract]:Objective to clone the cDNAof human cytokeratin CK9 and express the fusion protein by prokaryotic expression system. Methods RNAs were extracted from human keratinocyte cell line (HaCaT) and reverse transcripted cDNA.Human CK9 coding region was amplified by specific primer PCR and cloned into pET-28a vector. The expression of fusion protein his-CK9 was induced by IPTG. The fusion protein was purified by Ni 2 affinity chromatography and identified by SDS-PAGE and Western blot. Results the cDNA sequence of CK9 was correct, the fusion protein his-CK9 could be expressed in Escherichia coli, the purified fusion protein his-CK9 was of high purity, and the purified fusion protein his-CK9 could specifically bind to commercial CK9 antibody. Conclusion the prokaryotic expression vector pET-28a-CK9 was successfully constructed and the fusion protein his-CK9 was successfully induced and purified.
【作者單位】： 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中心;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;陜西省腫瘤精準醫(yī)學(xué)重點實驗室;西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚科;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部附屬紅會醫(yī)院骨壞死與關(guān)節(jié)重建病區(qū);西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科;西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81273211,81201373) 陜西省社會發(fā)展科技攻關(guān)項目(No.2016SF-238) 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院基金資助項目(No.2016QN-13)~~
【分類號】：R3416

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張志祥,姚其正;融合蛋白—— 一種新的生物工程技術(shù)[J];藥物生物技術(shù);2001年01期

2 李大鵬,王莉,衛(wèi)紅飛,張培因,吳秀麗,萬敏,王燕媚,王愛麗,楊世杰,王麗穎;熱休克蛋白65-MUC1融合蛋白對小鼠干擾素γ產(chǎn)生細胞的誘生作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2004年03期

3 曲梅花;于繼云;胡美茹;王守訓(xùn);黎燕;;人CD28-Fc融合蛋白在真核細胞中的表達與純化[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2005年05期

4 張榮媛;王靜;李茜;王航雁;;融合蛋白技術(shù)及臨床應(yīng)用進展[J];國際生物制品學(xué)雜志;2006年02期

5 何火聰;劉樹滔;潘劍茹;陳躬瑞;饒平凡;;GST-TAT-GFP融合蛋白的表達、純化及鑒定[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年04期

6 嚴世榮;閆瑩;孫軍;宗義強;王小波;屈伸;;TAT-EGFP融合蛋白對小鼠生物膜穿透性的研究[J];藥物生物技術(shù);2007年05期

7 馬大龍,郭淑君,鄭蕾,陳慰峰;在大腸桿菌高效表達人白細胞介素4融合蛋白[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1990年04期

8 楊和平，黃宗之;融合蛋白的生產(chǎn)技術(shù)[J];中國動脈硬化雜志;1994年04期

9 廉德君,許根俊;一種改進的融合蛋白親和層析純化方法[J];生物化學(xué)與生物物理進展;1998年03期

10 李文平,許靜,隋建華,宋增璇;抗人纖維蛋白單鏈抗體-鏈親和素融合蛋白的穩(wěn)定性及對動物纖維蛋白的識別[J];中國免疫學(xué)雜志;1999年09期

相關(guān)會議論文 前10條

1 祝強;黃智華;黃予良;覃揚;;rhEPO-L-Fc融合蛋白的克隆、表達、生物活性分析及初步藥代動力學(xué)研究[A];第九屆西南三省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2008年

2 高基民;呂建新;;白細胞介素15/鏈親和素融合蛋白的制備及活性測定[A];中國遺傳學(xué)會第八次代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

3 孫益;葛霽光;;人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子和可溶性人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子受體的融合蛋白的表達[A];中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第六次會員代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

4 楊振泉;劉巧泉;于恒秀;潘志明;焦新安;;新城疫病毒融合蛋白在轉(zhuǎn)基因水稻葉片中的表達及其免疫原性[A];中國生物工程學(xué)會第四次會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2005年

5 陳麗華;王強;侯萬國;;不同鏈接劑修飾的融合谷胱甘肽活性的研究[A];中國化學(xué)會第十二屆膠體與界面化學(xué)會議論文摘要集[C];2009年

6 王榮智;汪世華;林文雄;;抗體與酶融合技術(shù)研究[A];第十屆全國殺蟲微生物學(xué)術(shù)研討會暨全國生物農(nóng)藥與化學(xué)生物學(xué)研究與產(chǎn)業(yè)化會議論文摘要集[C];2006年

7 劉忠華;丁元生;胡忠義;;結(jié)核分枝桿菌38kD-16kD融合蛋白在大腸桿菌中的高效表達[A];2007年中國防癆協(xié)會全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

8 祖東;徐春曉;黃國錦;姚立紅;陳愛君;朱宏建;劉沐榮;張智清;;TNFRI∶IgGFc融合蛋白基因的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的高效表達[A];首屆長三角科技論壇——長三角生物醫(yī)藥發(fā)展論壇論文集[C];2004年

9 劉先俊;劉方欣;黎波;周輝云;王琴琴;;胸腺素α1與復(fù)合α干擾素融合蛋白的表達及其生物學(xué)活性[A];第九屆西南三省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2008年

10 楊燕凌;;酶(蛋白)融合技術(shù)研究[A];華東地區(qū)農(nóng)學(xué)會學(xué)術(shù)年會暨福建省科協(xié)第七屆學(xué)術(shù)年會農(nóng)業(yè)分會場論文集[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 記者 朱敏麗　通訊員 潘越;中國醫(yī)藥城首批融合蛋白試劑出口[N];泰州日報;2010年

2 吳紅梅;我省首批融合蛋白試劑出口美國[N];新華日報;2010年

3 金陵;融合蛋白試劑首次出口美國[N];中國醫(yī)藥報;2010年

4 記者 毛黎;美開發(fā)出癌癥治療新技術(shù)[N];科技日報;2009年

5 常麗君;線粒體融合蛋白2決定細胞生死[N];科技日報;2013年

6 通訊員 沈季 記者 張兆軍;抗腫瘤融合蛋白進入臨床試驗[N];科技日報;2005年

7 記者 張曄　通訊員 劉寧春;一種有效治療冠心病的融合蛋白發(fā)現(xiàn)[N];科技日報;2009年

8 ;吉大抗腫瘤生物工程新藥進入臨床試驗[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2005年

9 毛磊;新型抗流感藥物有望面世[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

10 曹麗君;英研制出新型抗流感藥物[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉星;赭曲霉毒素A納米抗體的免疫學(xué)檢測性能及分子作用機理研究[D];南昌大學(xué);2015年

2 吳芩;Npu DnaE intein的結(jié)構(gòu)與機理研究和蛋白質(zhì)雙模式成像探針的制備及應(yīng)用[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2015年

3 錢凱;胰高血糖素樣肽-1與人血清白蛋白融合蛋白的設(shè)計與改造[D];江南大學(xué);2015年

4 司成業(yè);基于融合蛋白構(gòu)建智能超分子組裝體[D];吉林大學(xué);2016年

5 范季瀛;候選藥物重組融合蛋白VAS-TRAIL的研究[D];華東理工大學(xué);2016年

6 高冬芳;纖維素酶作為融合蛋白在大腸桿菌中的應(yīng)用及其分泌機制的研究[D];山東大學(xué);2016年

7 宋琳琳;Ub-HBcAg-CTP融合蛋白誘導(dǎo)特異性細胞毒性T淋巴細胞反應(yīng)的實驗研究[D];上海交通大學(xué);2015年

8 劉寶平;家蠶表達的霍亂病毒B亞基融合蛋白防治1型糖尿病和阿爾茨海默癥研究[D];浙江大學(xué);2015年

9 周小虎;線粒體融合蛋白2在肝細胞肝癌中作用機制的研究[D];浙江大學(xué);2016年

10 陸遠;EGFR靶向單鏈抗體制備及介導(dǎo)siRNA內(nèi)化NSCLC細胞的生物學(xué)效應(yīng)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李園園;鯊魚TBC1D15蛋白功能的初步研究[D];浙江理工大學(xué);2015年

2 劉文慧;IL1Rα-HSA融合蛋白高表達菌株發(fā)酵工藝的優(yōu)化[D];浙江大學(xué);2015年

3 王爽;羰基還原酶的融合表達及固定化研究[D];江南大學(xué);2015年

4 郭海強;p53~(N239S)蛋白的表達與純化以及癌基因Kras~(G12D)與p53~(236S)促進小鼠罹患肺癌[D];昆明理工大學(xué);2015年

5 胡湘云;新城疫病毒融合蛋白納米抗體的篩選與鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

6 張銀閣;熒光標記重組乙型肝炎病毒載體的構(gòu)建[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 彭金秀;結(jié)核分枝桿菌持續(xù)感染致T細胞功能障礙的研究及融合蛋白AEMD和LT70的構(gòu)建[D];蘭州大學(xué);2015年

8 馬巧麗;B.melitensis外膜蛋白Omp25細胞毒性作用的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

9 宋琳;自噬協(xié)同泛素化降解機制下調(diào)E2A/Pbx1融合蛋白抑制B急淋白血病細胞的生長[D];蘇州大學(xué);2015年

10 趙煥榮;野蠶絲素含RGD肽段的制備及其細胞粘附、增殖性能的研究[D];蘇州大學(xué);2015年

，

本文編號：2127518