【摘要】：目的探討低氧預(yù)處理對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞表型、增殖、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分泌功能的影響。方法收集分娩過程中丟棄的臍帶組織,分離培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,將原代培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行傳代。取傳至第3代的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,隨機(jī)分為低氧組和常氧組,分別置于氧濃度為5%、21%的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6天。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的兩組細(xì)胞,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD44、CD45、CD90、HLA-DR表達(dá),細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)CD34及層粘連蛋白、波形蛋白表達(dá),實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、睫狀節(jié)神經(jīng)細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)mRNA表達(dá)。兩組培養(yǎng)1~6天進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),并采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性。結(jié)果兩組均高表達(dá)CD44、CD90、層粘連蛋白、波形蛋白,低表達(dá)CD45、HLA-DR、CD34,證實(shí)兩組細(xì)胞均具備間充質(zhì)干細(xì)胞表型特性;兩組上述細(xì)胞表型相關(guān)指標(biāo)表達(dá)比較P均0.05。兩組培養(yǎng)1~6天細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞增殖活性均先升高后降低;低氧組培養(yǎng)1~6天細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于常氧組,培養(yǎng)2~6天細(xì)胞增殖活性均高于常氧組(P均0.05)。低氧組BDNF、VEGF、HGF、CNTF mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于常氧組(P均0.05)。結(jié)論低氧預(yù)處理對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的表型特征無明顯影響,但可提高其增殖能力及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分泌功能。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of hypoxia preconditioning on phenotype, proliferation and neurotrophic factor secretion of umbilical cord mesenchymal stem cells. Methods the umbilical cord tissues were collected during delivery and the mesenchymal stem cells were isolated and cultured. The primary cultured mesenchymal stem cells were subcultured. Umbilical cord mesenchymal stem cells were randomly divided into hypoxia group and normoxic group and cultured in a constant temperature incubator with oxygen concentration of 5 ~ 21% for 6 days. The expression of HLA-DR was detected by flow cytometry, and CD34, laminin and vimentin were detected by immunofluorescence assay. The mRNA expressions of brain-derived neurotrophic factor (BDNF), vascular endothelial growth factor (VEGF), hepatocyte growth factor (HGF) and ciliary ganglion neurotrophic factor (CNTF) were detected by real-time fluorescence quantitative PCR. The cell count was measured by CCK-8 method on the 1st day and 6th day of culture in both groups, and the cell proliferation activity was detected by CCK-8 method. Results the expression of CD44 + CD90, laminin, vimentin, and low expression of CD45 ~ + HLA-DRN CD34 in both groups were high, which confirmed that both groups had phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells (MSCs), and the expression of phenotypic correlation indexes of these two groups were all 0.05. The cell count and cell proliferation activity in the hypoxia group were higher than those in the normoxic group, and the cell proliferation activity in the hypoxia group was higher than that in the normoxic group on the 1st day and the 6th day in the hypoxia group (all P 0.05), and the cell proliferation activity in the hypoxia group was higher than that in the normoxic group on the 6th day (P < 0.05). The relative expression of CNTF mRNA in hypoxia group was higher than that in normoxic group (P 0.05). Conclusion hypoxia preconditioning has no significant effect on phenotypic characteristics of umbilical cord mesenchymal stem cells, but can improve its proliferative ability and neurotrophic factor secretion.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81400996) 廣東省自然科學(xué)基金博士啟動(dòng)項(xiàng)目(2014A030310100)
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2123321