本文選題：腸出血性大腸埃希菌O157:H7 + 噬菌體�。� 參考：《吉林大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：腸出血性大腸埃希菌（enterohemorrhagic Escherichia coli, EHEC）O157：H7感染性腹瀉是世界范圍內(nèi)的公共衛(wèi)生問題。人感染EHEC O157：H7可表現(xiàn)為無癥狀攜帶者、腹瀉、出血性腸炎、溶血性尿毒癥和血栓性血小板減少性紫癜等臨床表現(xiàn)和較高的死亡率［1］。噬菌體是感染細(xì)菌的病毒，廣泛存在于自然環(huán)境中。毒性噬菌體對細(xì)菌裂解的特異性和高效性，，重新引起人們的重視，特別是近年來噬菌體在細(xì)菌性疾�。ㄌ貏e是耐藥性細(xì)菌所致的感染）的治療中具有獨特的作用。因此，開展針對EHEC O157：H7噬菌體的深入研究具有重要的現(xiàn)實意義和潛在的應(yīng)用價值。 本項研究以EHEC O157：H7為宿主菌，采用雙層瓊脂平板法從環(huán)境的污水中分離出一株能裂解EHEC O157：H7的毒性噬菌體，經(jīng)純化后對其生物學(xué)特性進(jìn)行了初步的分析。通過電鏡觀察，EHEC O157：H7噬菌體的頭部呈立體對稱，直徑約40nm，該噬菌體有一絲狀長尾（長約100nm）。根據(jù)其形態(tài)結(jié)構(gòu)EHEC O157：H7噬菌體在分類上屬于有尾病毒目，管尾病毒科。采用氯化銫密度梯度離心和超濾管離心法可以很好地富集純化后的噬菌體。噬菌體的核酸和酶切電泳顯示，其基因組大小約為30kb，且含有多個EcoR I和EcoR V的酶切位點。SDS-PAGE分析表明，該噬菌體含有13種蛋白（包括衣殼結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白）,相對分子量在220-16kD之間。 感染復(fù)數(shù)是研究噬菌體感染與產(chǎn)出之間量效關(guān)系的生物學(xué)指標(biāo)之一。將噬菌體和細(xì)菌以不同的比例混合后，在不同時間觀察噬菌體裂解宿主菌的效能。研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)EHEC O157：H7噬菌體與宿主菌的比例為1：100時，在180min的時間點，宿主菌的數(shù)量下降最為明顯，由最初的10~8CFU/mL下降至10~4CFU/mL。在繪制一步生長曲線時發(fā)現(xiàn)，從噬菌體感染宿主菌到子代噬菌體的釋放時間為10min，即噬菌體感染細(xì)菌的潛伏期。隨著宿主菌的不斷裂解和新的子代噬菌體的釋放，當(dāng)宿主菌接近全部被裂解時，噬菌體的數(shù)量達(dá)到最大值。從潛伏期到該時段為爆發(fā)期。本實驗的生長曲線顯示爆發(fā)時間是30min，裂解量為130PFU/cell。一般認(rèn)為如果潛伏期和爆發(fā)期的時間較短，從另一個側(cè)面亦可反映噬菌體裂解的高效能［2］。吸收率是噬菌體感染宿主菌的初期到噬菌體全部感染宿主菌的時間，本實驗表明在10min內(nèi)，游離的噬菌體就可以全部進(jìn)入宿主菌，說明該噬菌體的特異性強(qiáng)及較高感染效率。經(jīng)過噬菌體與不同細(xì)菌的交叉培養(yǎng)實驗證明，該噬菌體具有嚴(yán)格的種屬特異性。本實驗還觀察了三種保存方法對噬菌體活性的影響，觀察噬菌體的活性。在4℃情況下，采用氯仿、氯仿：SM緩沖液和雙層平板噬斑法保存噬菌體。結(jié)果表明：氯仿：SM緩沖液的保存效果比較理想，可以保存8個月而保持滴度不變。 對噬菌體生物學(xué)特性的全面了解是研制和開發(fā)抗菌生物制劑的前提。通過本研究，對此株腸出血性大腸埃希菌O157：H7噬菌體的生物學(xué)特性有了較初步的認(rèn)識，為該噬菌體的進(jìn)一步研究及動物實驗打下基礎(chǔ)。本實驗結(jié)果表明該噬菌體是一種裂解性強(qiáng)、特異性高的毒性噬菌體，如將腸出血性大腸埃希菌噬菌體作為抗生物制劑應(yīng)用在水源和環(huán)境的清潔、食品添加劑［3］及畜牧業(yè)領(lǐng)域?qū)兄鴱V泛的應(yīng)用前景。
[Abstract]:Enterohemorrhagic Escherichia coli ( EHEC ) 157 : H7 infectious diarrhea is a public health problem in the world . Human infection EHEC 157 : H7 can be expressed as asymptomatic carrier , diarrhea , hemorrhagic enteritis , hemolytic uremia and thrombopenia purpura , etc . The phage is a virus that is infected with bacteria and has a unique role in the treatment of bacterial diseases ( especially infections caused by drug - resistant bacteria ) .

In this study , EHEC O 157 鈭

本文編號：2114754