發(fā)布時(shí)間：2018-07-10 02:01

  本文選題：腎臟 + 足細(xì)胞�。� 參考：《吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2017年01期

【摘要】：目的:建立可操作性好、簡(jiǎn)單易行且效率較高的小鼠腎臟足細(xì)胞分離及原代培養(yǎng)模式,為其進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。方法:取C57/BL6J小鼠腎臟,通過差異過篩法獲取300目篩的腎小球,用制備好的KI-3T3培養(yǎng)基重懸腎小球后靜置于鋪被鼠尾膠原的培養(yǎng)皿中,4d后開始換液,7d后開始胰蛋白酶消化腎小球,并開始足細(xì)胞傳代培養(yǎng)。5~7d傳代1次,傳代2~3次后收集細(xì)胞鑒定。采用倒置扭轉(zhuǎn)顯微鏡觀察小鼠腎臟足細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn),采用PCR法檢測(cè)小鼠腎臟足細(xì)胞中nephrin,podocin和P-cadherin的表達(dá)。結(jié)果:腎小球種植3d后可見足細(xì)胞從組織中爬出,足細(xì)胞傳代培養(yǎng)7d后在倒置相差顯微鏡下可觀察到細(xì)胞胞體有突起生長(zhǎng)。PCR法檢測(cè),分離培養(yǎng)的足細(xì)胞表達(dá)nephrin、podocin和P-cadherin。結(jié)論:差異過篩結(jié)合消化酶技術(shù)能夠成功分離培養(yǎng)C57/BL6J小鼠腎臟足細(xì)胞。
[Abstract]:Objective: to establish a simple and efficient model of mouse kidney podocyte isolation and primary culture. Methods: three hundred mesh glomeruli of C57 / BL6J mouse kidney were obtained by differential sieve method. The glomeruli were suspended in the prepared KI-3T3 medium and put into a culture dish coated with rat tail collagen for 4 days. The glomeruli were digested by trypsin for 7 days. The podocytes were subcultured once for 7 days and collected for identification after 3 passages. The morphology of mouse renal podocytes was observed by inverted torsion microscope and the expression of nephrinpodocin and P-cadherin was detected by PCR. Results: podocytes could be seen crawling out of the tissue after 3 days of glomerular implantation. After 7 days of podocyte culture, the neurite growth of the cell body could be observed under inverted phase contrast microscope. The cultured podocin expressed nephrininpodocin and P-cadherin. Conclusion: differential screening combined with digestive enzyme technique can successfully isolate and culture renal podocytes of C57 / BL6J mice.
【作者單位】： 甘肅省人民醫(yī)院兒科;甘肅省中醫(yī)藥大學(xué)研究生處;寧夏醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金地區(qū)項(xiàng)目資助課題(81360114) 甘肅省科技廳技術(shù)研究與開發(fā)專項(xiàng)計(jì)劃資助課題(1305TCYA035) 甘肅省衛(wèi)計(jì)委行業(yè)項(xiàng)目資助課題(GSWSKY-2015-12) 甘肅省委組織部隴原青年創(chuàng)新人才扶持計(jì)劃資助課題[甘組通字(2014)4號(hào)]
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2111592