發(fā)布時間：2018-07-09 12:37

  本文選題：鉤端螺旋體 + 人獸共患病　； 參考：《浙江大學》2011年博士論文

【摘要】：鉤端螺旋體(簡稱鉤體)是細長、螺旋狀的細菌,分為致病性的問號鉤體(Leptospira interrogans)(至少十二種)和腐生性的雙曲鉤體(Leptospira biflexa)(至少四種)兩大類。鉤端螺旋體病(Leptospirosis,簡稱鉤體病)則是由致病性鉤體引起的全世界傳播的人獸共患病,我國也是鉤體病的主要流行疫區(qū)之一。人類通常由于職業(yè)或者馴養(yǎng)等原因直接或通過被污染的水或土壤間接接觸帶菌動物的尿液,由此,鉤體通過小傷口甚或完整的皮膚粘膜進入人體,經(jīng)血液循環(huán)系統(tǒng)播散到肺,肝,腎等器官。因個體免疫水平的差異及受染菌株的不同,鉤體病臨床表現(xiàn)輕重不一,典型者出現(xiàn)嚴重的以黃疸、結膜充血和腎衰為特征的Weil's綜合癥。動物感染鉤體后通常不發(fā)病,而成為無癥狀攜帶者,其腎小管中的鉤體可隨尿液脫落而污染環(huán)境。因此宿主的腎臟帶菌狀態(tài)是鉤體病持續(xù)和流行的一個非常關鍵的核心環(huán)節(jié)。為了進一步了解鉤體的侵襲性及其腎臟生存,在本研究中,我們選取HEK293、J774A.1、和COS-7等三株代表性的細胞和強毒力的問號鉤體賴株作為研究對象,對鉤體感染的細胞進行一系列的透射電鏡,免疫熒光顯微鏡,激光共聚焦顯微鏡觀察及western blot分析。我們的結果表明強毒力的問號鉤體賴株能在不影響細胞緊密連接(緊密粘連蛋白1)的情況下穿入HEK293細胞；而腐生型的雙曲鉤體則不能主動穿過而是被HEK293細胞吞噬形成吞噬體,并伴有緊密粘連蛋白1表達量的下降及密度的降低。我們還發(fā)現(xiàn)強毒力的問號鉤體賴株能以菌體一端或兩端黏附于J774A.1細胞,其中大約80%黏附的鉤體被吞噬形成吞噬體；含鉤體的吞噬體能在胞內進一步成熟并與晚期內體/溶酶體共區(qū)域化；此外,透射電鏡結果顯示含鉤體的吞噬體的成熟過程符合Desjardins等提出的"kiss-and-run"機制。此外,我們發(fā)現(xiàn)黏附到COS-7細胞的強毒力的問號鉤體賴株只有大約40%能被吞噬形成吞噬體,吞噬體內的鉤體后來似乎能從吞噬體逃逸/被釋放到胞漿中呈游離狀態(tài)。盡管一副完整的有關鉤體致病因子的圖畫仍需繪制,我們的實驗結果一定程度上驗證了鉤體的侵襲性在其致病中的作用,揭示了鉤體在吞噬細胞內的轉歸/結局,探索了鉤體在腎臟細胞中的寄居生存,為進一步研究如何預防鉤體病以及如何切斷鉤體傳染源控制鉤體的傳播提供了理論參考。
[Abstract]:Leptospira leptospira (Leptospira interrogans) () is a slender, spiral bacterium, which is divided into two groups: Leptospira interrogans) (at least 12 species) and rot (Leptospira biflexa) (at least four species). Leptospirosis (Leptospirosis) is a zoonotic disease of human and animal caused by pathogenic leptospirosis, and it is also one of the main epidemic areas of leptospirosis in China. Humans, for reasons such as occupation or domestication, have direct or indirect contact with the urine of the animal carrying the bacteria, either directly or through contaminated water or soil. As a result, the leptospira enters the body through small wounds or even complete skin and mucous membranes and spreads through the blood circulatory system to the lungs. Liver, kidney, etc. The clinical manifestations of leptospirosis were different due to the difference of individual immune level and infected strains. The typical patients had severe Weilers syndrome characterized by jaundice conjunctival congestion and renal failure. After infection with leptospirosis, animals are usually asymptomatic carriers, and their renal tubule leptosomes can pollute the environment with urine falling off. Therefore, the host kidney carrying state is a very key link in the persistence and prevalence of leptospirosis. In order to further understand the invasiveness of Leptospira and its renal survival, we selected three representative cells, HEK293TJ774A.1and COS-7, as well as virulent Leptospira strains. A series of transmission electron microscopy, immunofluorescence microscope, laser confocal microscope and western blot analysis were performed on the cells infected with leptospira. Our results show that the highly virulent Leptospira strain can penetrate into HEK293 cells without affecting the tight junctions of the cells (tight adhesion protein 1), while the saprophytic hyperbolic leptospirosis can not actively pass through but be swallowed by HEK293 cells to form phagocytosomes. It was accompanied by a decrease in the expression and density of compact adhesion protein 1. We also found that the highly virulent Leptospira strain could adhere to J774A.1 cells at one or both ends of the cell, about 80% of which were phagocytic. The phagocytic activity of Leptospira was further matured in the cell and compartmentalized with late Leptosome / lysosome. In addition, transmission electron microscopy showed that the maturation process of Leptospira phagocytosis was in accordance with the "kiss-and-run" mechanism proposed by Desjardins et al. In addition, we found that only about 40% of the highly virulent Leptospira strains attached to COS-7 cells could be phagocytized, and the Leptospira in the phagocytic body appeared to escape from the phagocytosis and be released into the cytoplasm in a free state. Although a complete picture of the pathogenic factors of leptospirosis still needs to be drawn, our experimental results demonstrate to some extent the role of leptospira invasiveness in the pathogenesis of leptospirosis, and reveal the outcome / outcome of leptospirosis in phagocytes. The sojourn survival of leptospirosis in renal cells was explored, which provided a theoretical reference for further study on how to prevent leptospirosis and how to cut off the source of infection to control the spread of leptospirosis.
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R377

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8 張芳,李文俊,楊宏亮,何平,郭曉奎,姜敘誠;問號鉤體鞭毛蛋白相關基因分析[J];中國人獸共患病雜志;2004年12期

9 秦進才;我國鉤端螺旋體菌苗的成就與展望[J];微生物學免疫學進展;1996年01期

10 張燕華,許玉堂,曹勇,戴保民;不同種屬鉤端螺旋體疏水外膜蛋白的特征研究[J];中華微生物學和免疫學雜志;1998年03期

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1 張加勇;孫剛;王宇祥;;PCR快速檢測羊鉤端螺旋體DNA[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會成立20周年慶典暨第十次學術研討會論文集（下）[C];2003年

2 寇志華;張平武;孫樹漢;陳祖歡;;鉤端螺旋體DNA疫苗pcDL41的構建、體外表達及免疫保護效果[A];中國生物工程學會第三次全國會員代表大會暨學術討論會論文摘要集[C];2001年

3 江南;吳佳玉;陳道邦;戴保民;;重組鉤體基因疫苗與不同毒力鉤體交叉免疫研究[A];中華醫(yī)學會第七次全國感染病學術會議論文匯編[C];2001年

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1 記者 胡德榮;鉤體菌基因組測序完成[N];健康報;2000年

2 張芹;汛期慎防傳染病[N];中國中醫(yī)藥報;2000年

3 江蘇省農科院獸醫(yī)所 倪艷秀 林繼煌;豬鉤端螺旋體病[N];江蘇農業(yè)科技報;2004年

4 周勝華;汛期須防疾病流行[N];中國消費者報;2003年

5 作者：謝元林;謹防鉤體病乘“水”而入[N];大眾衛(wèi)生報;2002年

6 ;在“管、辦、轉”中深化改革[N];中國文化報;2003年

7 新華社記者 丁文杰;給村民打過期疫苗，，只是罰款了事[N];新華每日電訊;2003年

8 省衛(wèi)生防疫站 潘亮;大災之后防大疫 重點要防鉤體病[N];福建科技報;2002年

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10 孟靚 記者 施淵;江蘇省食品安全專項整治取得階段性成果[N];中國食品質量報;2004年

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1 趙計林;問號賴型鉤端螺旋體毒力新基因的篩選及其功能研究[D];四川大學;2003年

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1 倪勇;昆明北車輛段新建車鉤緩沖裝置檢修間方案設計[D];西南交通大學;2006年

2 釗守鳳;鉤端螺旋體屬特異性表面蛋白抗原融合基因lipL32/1-ompL1/1原核表達系統(tǒng)的構建、表達和鑒定及酵母表達系統(tǒng)的構建[D];浙江大學;2004年

本文編號：2109381