本文選題：1、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 + IGF-I　； 參考：《蘭州大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的：1、探討并優(yōu)化人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hunman Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells hUCMSCsi)體外分離.純化.擴(kuò)增及培養(yǎng)條件,并對(duì)其基本生物學(xué)特性進(jìn)行研究；2、觀察不同劑量外源性IGF-1對(duì)hUCMSCs體外增殖的影響及其量效關(guān)系；3、觀察在不同濃度IGF-1處理下,人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCsi)誘導(dǎo)成脂后生長(zhǎng)狀態(tài)的變化,初步探討用于促進(jìn)hUCMSCs誘導(dǎo)成脂的最適IGF-1濃度。 方法：1、將剔除血管的新鮮新生兒臍帶組織切成小塊培養(yǎng),得到貼壁細(xì)胞,倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞表面抗原；化學(xué)染色檢測(cè)其體外成脂和成骨誘導(dǎo)分化能力；2、取第3代hUCMSCs接種于96孔板,分為7組(G1,G2…,G7)。前5組分別加入含不同劑量IGF-I(40,60,80,100,120μg/L)的體積分?jǐn)?shù)為0.02的胎牛血清培養(yǎng)液；第6組加入體積分?jǐn)?shù)為0.05的胎牛血清培養(yǎng)液做為陽(yáng)性對(duì)照,第7組加入體積分?jǐn)?shù)為0.02的胎牛血清培養(yǎng)液做為陰性對(duì)照,采用MTT法觀察不同劑量的IGF-I對(duì)細(xì)胞增殖的影響。3、將第3代的hUCMSCs隨機(jī)分為5組,在成脂誘導(dǎo)24h后,分別加入40 ng/ml,、60 ng/ml、80 ng/ml,、100 ng/ml和120 ng/ml的IGF-1,對(duì)5組樣本進(jìn)行四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)其光密度值(optical density,OD值)。取第8天的樣本進(jìn)行油紅O染色,觀察脂滴形成情況,計(jì)算紅色脂滴數(shù)量,并利用多個(gè)樣本均數(shù)的方差分析法比較5組之間的差別 結(jié)果：1、體外培養(yǎng)4-6天后,有細(xì)胞從組織塊中游出；細(xì)胞傳代培養(yǎng)至第10代,無(wú)明顯的形態(tài)和增殖能力改變；細(xì)胞表達(dá)CD13,CD44,而CD14、D34、HLA-DR表達(dá)成陰性。體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)證實(shí),該細(xì)胞成脂和成骨分化的能力；2、①第3、第6天,G1組、G2組和G7組之間差異無(wú)顯著性(P0.05)；G3組、G4組和G5組之間差異無(wú)顯著性(P0.05)。②第3天,G6組增殖高于G1組與G2組,低于G3組、G4組和G5組,差異有顯著性(P0.000或0.006)；第4天,G6組增殖高于其余各組,差異有顯著性(P0.000或0.006)。③第3天、第6天,G1組、G2組和G6組低于G3組,G4組,G5組,差異有顯著性(P0.000)；G6組增殖高于G7組,統(tǒng)計(jì)分析差異有顯著性(P0.000)。3、①各組OD值之間的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；②80 ng/ml組、100ng/ml組和120ng/ml組成脂數(shù)量明顯多于40ng/ml組與60ng/ml組,P值均小于0.01；而80ng/ml組、100ng/ml組和120ng/ml組3組之間在成脂數(shù)量上的差異沒(méi)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05).結(jié)論：80 ng/ml為IGF-1促進(jìn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成脂的適宜濃度。 結(jié)論：1、hUCMSCs能在體外培養(yǎng)、純化及擴(kuò)增,其基本生物學(xué)特性和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相似；2、外源性IGF-I對(duì)hUCMSCs增殖的促進(jìn)作用,隨IGF-I濃度增高而有增高趨勢(shì),100μg/L為其較適合濃度,為實(shí)現(xiàn)hUCMSCs體外快速擴(kuò)增提供適宜的條件；3、80 ng/ml為IGF-1促進(jìn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成脂的適宜濃度。
[Abstract]:Objective to investigate and optimize the isolation of human umbilical cord mesenchymal stem cells (hunman UCM SCsi) in vitro. Purification. The effects of different doses of exogenous IGF-1 on the proliferation of hUCMSCs in vitro and the dose-response relationship between IGF-1 and HUCMSCs were observed, and the effects of different concentrations of IGF-1 on the proliferation of hUCMSCs were observed. The changes of growth state of human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUCMSCsi) induced by lipids were studied. Methods: 1. Fresh umbilical cord tissue was cut into small pieces and adherent cells were obtained. Cell morphology was observed by inverted phase contrast microscope, cell growth curve was plotted by cell count, and cell surface antigen was measured by flow cytometry. The ability of adipogenic and osteogenic differentiation in vitro was detected by chemical staining. The 3rd generation of hUCMSCs was inoculated on 96 well plate and divided into 7 groups (G1G 2. G7). The first five groups were fed with 0.02 fetal bovine serum culture medium containing different doses of IGF-I (4060 渭 g / L, 80100120 渭 g / L), the sixth group added 0.05 fetal bovine serum culture medium as positive control. In group 7, the effects of different doses of IGF-I on cell proliferation were observed by MTT assay, and the third passage of hUCMSCs were randomly divided into 5 groups. The optical density value (OD value) was measured by MTT method in 5 groups of IGF-1 with the addition of 40 ng / ml ~ (60) ng / ml ~ (-1) ~ (80) ng / ml ~ (-1) and 120 ng/ml of IGF-1, respectively. The samples on the 8th day were stained with oil red O, the formation of lipid droplets was observed, the number of red lipid droplets was calculated, and the difference between the five groups was compared by the variance analysis method of the mean numbers of several samples. The difference between the five groups was compared by using the analysis of variance. After 4-6 days of culture in vitro, the difference between the five groups was compared. There were no obvious changes in morphology and proliferative ability of the cells from tissue mass to the 10th passage, and the expression of CD13, CD44 and HLA-DR in CD14 D34 was negative. In vitro induction experiments confirmed that there was no significant difference between G _ 2 group and G _ 7 group in the ability of adipogenic and osteogenic differentiation between G _ 2 group and G _ 7 group on the 3rd and 6th day (P0.05). There was no significant difference between G3 group G4 group and G5 group (P0.05) on the 3rd day, the proliferation of G6 group was higher than that of G1 group and G2 group, and lower than that of G3 group G4 group and G5 group (P0.000 or 0.006), the proliferation of G6 group was higher than that of other groups on the 4th day. The difference was significant (P0. 000 or 0.006) on the 3rd day. On the 6th day, the proliferation of G6 group was higher than that of G7 group, while that of G6 group was lower than that of G3 group G4 group G5 group, and on the 6th day, the proliferation of G6 group was higher than that of G7 group. There was no significant difference in OD value between the three groups (P0. 000). 3. There was no significant difference in OD value between the three groups (P0.05). The amount of lipid composition of 100ng / ml and 120ng/ml in 280 ng/ml group was significantly higher than that in 40ng/ml group and 60ng/ml group (P < 0.01). However, there was no significant difference in fat production between 80ng/ml group (100ng / ml) and 120ng/ml group (P0.05). Conclusion the optimal concentration of IGF-1 for inducing lipids induced by human umbilical cord mesenchymal stem cells is ng/ml. Conclusion the primary biological characteristics of human UCMSCs cultured, purified and amplified in vitro are similar to those of bone marrow mesenchymal stem cells. The effect of exogenous IGF-I on the proliferation of hUCMSCs is similar to that of bone marrow mesenchymal stem cells. The suitable concentration of IGF-I is 100 渭 g / L with the increase of IGF-I concentration. In order to achieve rapid expansion of human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUCMSCs) in vitro, the suitable conditions for the rapid expansion of hUCMSCs in vitro were established.
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：2089134