本文選題：神經(jīng)元 + 干細(xì)胞　； 參考：《中國(guó)全科醫(yī)學(xué)》2017年33期

【摘要】：目的探討Let-7b在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)分化為神經(jīng)元過程中的作用。方法 2013年1—12月將80只SPF級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、Let-7b-up慢病毒載體(LV-rno-Let-7bup)組、Let-7b-inhibition慢病毒載體(LV-rno-Let-7b-inhibition)組,每組20只。將陰性對(duì)照組、LV-rnoLet-7b-up組、LV-rno-Let-7b-inhibition組大鼠分別感染EGFP空病毒,采用頸椎脫臼法處死4組大鼠,并獲取MSCs,傳代培養(yǎng)4代后備用。取傳代培養(yǎng)的MSCs感染慢病毒,具體為:空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組不進(jìn)行感染,LVrno-Let-7b-up組、LV-rno-Let-7b-inhibition組分別感染LV-rno-Let-7b-up、Let-7b-inhibition,采用MTT法檢測(cè)感染前、感染后24 h、感染后5 d MSCs存活率。采用法舒地爾對(duì)4組進(jìn)行誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn),觀察MSCs分化為神經(jīng)元的分化效率。采用免疫組化法檢測(cè)4組神經(jīng)元烯醇化酶(NSE)、神經(jīng)微管結(jié)合蛋白(MAP-2)、微管相關(guān)蛋白(Tau)水平,RT-PCR法檢測(cè)4組NSE、MAP-2、Tau mRNA水平。結(jié)果 LV-rno-Let-7b-up組MSCs于LVrno-Let-7b-up感染后第3天熒光表達(dá)最強(qiáng),LV-rno-Let-7b-inhibition組MSCs于LV-rno-Let-7b-inhibition感染后第5天熒光表達(dá)最強(qiáng)。感染第5天時(shí),陰性對(duì)照組、LV-rno-Let-7b-up組、LV-rno-Let-7b-inhibition組MSCs感染率分別為87.46%、86.81%、87.12%。感染后24 h、5 d陰性對(duì)照組、LV-rno-Let-7b-up組、LV-rno-Let-7b-inhibition組MSCs存活率低于空白對(duì)照組(P0.05);陰性對(duì)照組、LV-rno-Let-7b-up組、LV-rno-Let-7b-inhibition組感染后5 d MSCs存活率高于感染后24 h(P0.05)。陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組部分MSCs呈現(xiàn)神經(jīng)元樣改變;LV-rno-Let-7b-up組極大部分MSCs出現(xiàn)典型的神經(jīng)元樣結(jié)構(gòu);LV-rno-Let-7b-inhibition組僅有少量MSCs出現(xiàn)典型的神經(jīng)元樣結(jié)構(gòu)。LV-rno-Let-7b-up組NSE、MAP-2、Tau及其mRNA水平高于空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組(P0.05);LV-rno-Let-7b-inhibition組NSE、MAP-2、Tau及其mRNA水平低于空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組(P0.05)。結(jié)論感染LV-rno-Let-7b-up后大鼠MSCs分化為神經(jīng)元的分化效率增加,提示Let-7b可促進(jìn)MSCs向神經(jīng)元分化。
[Abstract]:Objective to investigate the role of Let-7b in the differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) into neurons. Methods from January to December 2013, 80 SPF SD rats were randomly divided into blank control group and LV-rno-Let-7bup group, 20 rats in each group were divided into two groups: LV-rno-Let-7b-inhibition group (LV-rno-Let-7b-inhibition) group and LV-rno-Let-7b-inhibition group (LV-rno-Let-7b-exhibition) group. The rats of LV-rnoLet-7b-up group in negative control group were infected with EGFP empty virus respectively. The rats of 4 groups were killed by cervical dislocated method. MSCs were obtained and cultured for 4 generations. The cultured MSCs were infected with lentivirus. The control group and negative control group were respectively infected with LV-rno-Let-7b-inhibition group. The survival rate of MSCs before infection, 24 hours after infection and 5 days after infection was detected by MTT method. The differentiation efficiency of MSCs into neurons was observed by using fasudil to induce the four groups. The levels of neuron enolase (NSE), neural microtubule-binding protein (MAP-2) and microtubule-associated protein (Tau) were detected by immunohistochemistry. Results the fluorescence expression of MSCs in LV-rno-Let-7b-up group was the strongest on the 3rd day after LVrno-Let-7b-up infection. The fluorescence expression of MSCs in LV-rno-Let-7b-exhibition group was the strongest on the 5th day after LV-rno-Let-7b-inhibition infection. On the 5th day of infection, the infection rate of MSCs in LV-rno-Let-7b-up group in negative control group was 87.46 and 87.12 in LV-rno-Let-7b-exhibition group, respectively. The survival rate of MSCs in the LV-rno-Let-7b-up group was lower than that in the control group (P0.05), and the survival rate of MSCs in the LV-rno-Let-7b-inhibition group was higher than that in the LV-rno-Let-7b-inhibition group at 5 days after infection (P0.05). In the negative control group and the blank control group, some MSCs showed neuron-like changes. Most of the MSCs in the LV-rno-Let-7b-up group showed typical neuron-like structure. Only a small number of MSCs in the LV-rno-Let-7b-exhibition group showed typical neuron-like structure. The NSEV-rno-Let-7b-up group showed higher NSE-MAP-2Tau and mRNA levels than those in the blank control group. LV-rno-Let-7b-inhibition group (P0.05) had lower mRNA levels of NSE-MAP-2Tau and negative control group (P0.05). Conclusion the differentiation efficiency of MSCs into neurons increased after infection with LV-rno-Let-7b-up, suggesting that Let-7b can promote the differentiation of MSCs into neurons.
【作者單位】： 鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;莫斯科國(guó)立謝東諾夫第一醫(yī)科大學(xué);鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81071114,81371385)
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2083941