本文選題：Red重組 + OmpW��； 參考：《浙江理工大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：根據(jù)革蘭氏染色我們將細(xì)菌分為革蘭氏陽性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌。革蘭氏陽性細(xì)菌的外壁主要為肽聚糖，其蛋白質(zhì)含量是很低的；但是革蘭氏陰性細(xì)菌的外壁比較復(fù)雜，，除細(xì)胞質(zhì)膜外還包括周質(zhì)空間和外膜。歷史上爆發(fā)的許多大規(guī)模傳染病都是由革蘭氏陰性菌引起的。 先天性免疫是人和動物抗微生物感染的重要防御機(jī)制之一。它主要包括皮膚、粘膜和胎盤的屏障作用；吞噬細(xì)胞的吞噬作用；補(bǔ)體對微生物的殺傷作用。同時(shí)，細(xì)菌經(jīng)過長期的選擇進(jìn)化也產(chǎn)生了針對人和動物先天性免疫作用的對抗機(jī)制。最近幾年，人們對革蘭氏陰性菌的外膜和外膜蛋白進(jìn)行了較多的研究，發(fā)現(xiàn)其具有抵抗人體殺菌的功能。 其中，外膜蛋白OmpW廣泛存在于革蘭氏陰性菌中，由8條β折疊鏈組成，形成一個長長的窄的疏水通道。OmpW參與細(xì)菌的多種抗性，包括耐藥性、對鹽濃度的耐受性等，并且OmpW的表達(dá)變化與一些疾病有關(guān)，如炎癥性腸病、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎等。由此可見，OmpW對于細(xì)菌抵抗外界環(huán)境起著重要的作用。正是由于OmpW的多種重要功能，運(yùn)用Red重組技術(shù)構(gòu)建了大腸埃希氏菌OmpW敲除菌（ΔOmpW），通過比較正常菌K12和ΔOmpW的抗巨噬細(xì)胞吞噬和抗血漿補(bǔ)體的殺菌作用來研究OmpW在抗先天性免疫中的作用。 體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)均表明ΔOmpW易被巨噬細(xì)胞吞噬，且易被血漿補(bǔ)體殺滅。通過提取正常菌和巨噬細(xì)胞內(nèi)存活菌的膜蛋白經(jīng)SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn)OmpW的表達(dá)量升高。因此，認(rèn)為OmpW在細(xì)菌抵抗宿主的先天性免疫過程中起著重要的作用。小鼠的主動保護(hù)實(shí)驗(yàn)是對小鼠進(jìn)行OmpW免疫，對免疫組小鼠和未免疫組小鼠注射正常菌K12。結(jié)果免疫組小鼠都存活，未免疫組小鼠都死亡。說明針對OmpW的抗體能保護(hù)小鼠免受細(xì)菌的感染。也從另一角度反映了OmpW對于抵抗宿主免疫的重要性。 本研究初步揭示了OmpW的抗先天性免疫功能，為進(jìn)一步研究OmpW在抗吞噬和抗補(bǔ)體殺菌過程中的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)，對感染性疾病的控制、治療具有重要的理論和實(shí)踐意義。
[Abstract]:According to Gram staining, bacteria are divided into Gram-positive bacteria and Gram-negative bacteria. The outer wall of Gram-positive bacteria is mainly peptidoglycan, and its protein content is very low, but the outer wall of Gram-negative bacteria is more complicated, including the periplasmic space and outer membrane in addition to the cytoplasmic membrane. Many large-scale infectious diseases in history have been caused by gram-negative bacteria. Innate immunity is one of the important defense mechanisms against microbial infection in humans and animals. It mainly includes the barrier of skin, mucosa and placenta, phagocytosis of phagocytes and the killing effect of complement on microorganism. At the same time, bacteria have evolved over a long period of time to produce a mechanism of antagonism against the innate immunity of humans and animals. In recent years, many studies have been carried out on the outer membrane and outer membrane proteins of Gram-negative bacteria. OmpW, an outer membrane protein, is widely found in Gram-negative bacteria and consists of eight 尾 -fold chains, forming a long, narrow hydrophobic channel. OmpW is involved in a variety of bacterial resistance, including drug resistance, tolerance to salt concentration, and so on. And the expression of OmpW is related to some diseases, such as inflammatory bowel disease, reactive arthritis and so on. It can be seen that OmpW plays an important role in bacterial resistance to the external environment. Because of the many important functions of OmpW, Using Red recombination technique, the OmpW knockout bacteria of Escherichia coli (螖 OmpW) were constructed. By comparing the anti-macrophage phagocytosis of normal bacteria K12 and 螖 OmpW and the bactericidal effect of anti-plasma complement, the role of OmpW in anti-congenital immunity was studied. In vivo and in vitro experiments showed that 螖 OmpW was easily phagocytized by macrophages and easily killed by plasma complement. The expression of OmpW was increased by SDS-PAGE analysis of membrane protein extracted from normal bacteria and macrophage survival bacteria. Therefore, OmpW plays an important role in bacterial innate immunity against host. Mice were immunized with OmpW, and K12 was injected into immunized and unimmunized mice. Results all the immunized mice survived and the unimmunized mice died. It showed that the antibody against OmpW could protect mice from bacterial infection. It also reflects the importance of OmpW in resisting host immunity. This study initially revealed the anti-congenital immune function of OmpW, which laid a foundation for further study of the mechanism of OmpW in the process of anti-phagocytosis and anti-complement sterilization, and had important theoretical and practical significance for the control and treatment of infectious diseases.
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R378

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本文編號：2067561