本文選題：刀豆 + 凝集素��； 參考：《西北大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：凝集素(lectin)是一種非抗體類的蛋白質(zhì)或糖蛋白,它能與糖類專一地非共價(jià)結(jié)合,并具有凝集細(xì)胞和沉淀聚糖和復(fù)合糖的作用。凝集素在生物界廣泛分布,存在于動(dòng)物,植物以及微生物中。在各種凝集素中,刀豆凝集素(Concanavalin A, ConA)應(yīng)用最為廣泛。本文以刀豆(Canavalia gladiata (Jacq.) DC)干種籽粒為原材料,優(yōu)化刀豆凝集素提取、純化工藝,并對(duì)其寡糖鏈結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步探究,主要包含以下幾部分： 1.刀豆凝集素的分離、純化以及分提取工藝優(yōu)化 500g刀豆種子首先粉碎后過60目篩子,然后利用低沸點(diǎn)(30～60℃)石油醚脫脂后得到410g脫脂干粉,用pH7.4,0.01mol/L的PBS緩沖液提取水溶性蛋白質(zhì)。采用鹽析(硫酸銨分級(jí)沉淀)法得到水溶性刀刀豆凝集素粗品10.6g,得率為2.12%。粗品刀豆凝集素再經(jīng)過DEAE-纖維素柱和SephadexG-100親和層析柱純化得到刀豆凝集素1.6g,最終得率為0.32%。 刀豆凝集素對(duì)熱穩(wěn)定,通過對(duì)不同溫度下提取得到凝集素的血凝活力進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)純化過程在室溫下完成,也可以獲得比較理想的效果。傳統(tǒng)純化工藝中比較繁瑣,應(yīng)用于微量分析時(shí)比較費(fèi)時(shí)。因此本文采用了優(yōu)化的純化工藝：刀豆凝集素溶解在PBS緩沖液后,直接進(jìn)行SephadexG-100親和層析柱純化,縮短了提取周期,提高了純化效率。 2.理化性質(zhì)的研究 通過HPLC、GC, GC-MS、IR、紫外分光光度計(jì)等儀器對(duì)刀豆凝集素的理化性質(zhì)進(jìn)行了研究(表1)。刀豆凝集素是一種重要的糖蛋白,研究發(fā)現(xiàn)：刀豆凝集素的亞基相對(duì)分子量為3.14×104,刀豆凝集素的蛋白含量為93.75%,糖含量為7.28%。在非還原性條件下經(jīng)過堿水解后,刀豆凝集素中特定氨基酸(形成糖肽鍵的Ser與Thr)轉(zhuǎn)化為α-氨基丙烯酸和α-氨基丁烯酸,根據(jù)紫外光圖譜分析得知刀豆凝集素上的寡糖鏈與蛋白鏈接方式為O-連接。刀豆凝集素中寡糖鏈?zhǔn)峭ㄟ^Ser或Thr形成O-糖苷鍵與蛋白部分連接。 3.刀豆凝集素糖鏈的結(jié)構(gòu)研究 刀豆凝集素經(jīng)Pronase E酶解后得到其寡糖鏈,經(jīng)過微晶纖維素除去蛋白質(zhì)和Dowex50(H+)陽離子交換樹脂除去鹽分,再通過甲基化分析、部分酸水解,結(jié)合氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用等結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)刀豆凝集素寡糖鏈中Ara殘基之間的連接方式是1-3連接。純化后的寡糖鏈經(jīng)過ESI-MS分析,推測(cè)刀豆凝集素寡糖鏈結(jié)構(gòu)可能為寡聚Ara如下圖所示：
[Abstract]:Lectin (lectin) is a kind of non-antibody protein or glycoprotein, which can bind to carbohydrate specifically and has the functions of agglutination cells, precipitated polysaccharides and complex sugar. Lectin is widely distributed in animals, plants and microorganisms. Concanavalin A (Cona) is the most widely used lectin. Canavalia gladiata (Jacq.) DC) dry seed was used as raw material to optimize the extraction and purification process of concanavan lectin, and its oligosaccharide chain structure was preliminarily studied, including the following parts: 1. Separation, purification and extraction of concanavan lectins 500g seeds were first crushed and then filtered through 60 meshes, then degreased with petroleum ether at low boiling point (30 ~ 60 鈩，

本文編號(hào)：2065926