本文選題：血紅素氧合酶-1 + 膽道　； 參考：《昆明醫(yī)科大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的： 本研究通過調節(jié)肝臟血紅素氧合酶-1(HO-1)的表達,來觀察其對肝臟膽鹽轉運蛋白表達的影響,探討其對大鼠膽道上皮細胞缺血再灌注損傷(IRI)的作用及其可能機制。 方法： 1.采用Fei X等報道的方法操作,建立70%肝臟缺血再灌注損傷模型。 2.使用化學合成的Ad-HO-1、Ad-HO-1-siRNA,以及空腺病毒載體和生理鹽水,經陰莖背靜脈注射導入大鼠肝臟,24小時后開腹,建立大鼠肝臟缺血再灌注損傷模型。動物隨機分為4組：生理鹽水對照組(n=32)；空載體組(n=32)；HO-1組(n=32),注射劑量為2×109TU/只,MOI=1；siRNA組(n=32),注射劑量為2×109TU/只,MOI=1。各組再分別于再灌注損傷后1h、1d、1w和2w處死8只大鼠。檢測肝臟缺血再灌注后血清中谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、總膽紅素(TB)、堿性磷酸酶(ALP)水平；ELISA法檢測IL-6IL-10、HGF、TNF-a在血清中的水平；熒光定量PCR檢測膽鹽輸出泵(Bsep) mRNA、多藥耐藥蛋白2(Mrp2) mRNA和�；悄懰徕c共轉運蛋白(Ntcp) mRNA的表達,以及肝組織1d時相點HO-1的mRNA表達；Western Blotting檢測肝組織Ntcp蛋白的表達；肝臟及肝門部膽管組織標本行免疫熒光雙染及氯醋酸酯酶染色,觀察大小膽管及周圍肝組織形態(tài)結構的變化。 結果： 1.共成功實行大鼠肝臟缺血再灌注損傷模型128例,肝臟部分缺血時間為45min。 2.相同時相點比較,HO-1組血清ALT、AST、TB、ALP低于對照組和空載體組(p0.05)：siRNA組血清ALT、AST、TB、ALP含量高于對照組和空載體組(p0.05)；HO-1組明顯低于siRNA組(p0.01),有統(tǒng)計學意義。 3.相同時相點比較, siRNA組血清HGF、IL-10明顯低于對照組和空載體組(p0.05)；HO-1組血清HGF、IL-10明顯高于對照組和空載體組(p0.05)；HO-1組明顯高于siRNA組(p0.01),有統(tǒng)計學意義。HO-1組血清AIL-6、TNF-a低于對照組和空載體組(p0.05)；siRNA組血清IL-6、TNF-a含量高于對照組和空載體組(p0.05)；HO-1組明顯低于siRNA組(p0.01),有統(tǒng)計學意義。 4.相同時相點比較,HO-1組HO-1、Ntcp、Bsep、Mrp2mRNA表達水平高于對照組和空載體組(p0.05)；siRNA組HO-1、Ntcp、Bsep、Mrp2mRNA表達水平低于對照組和空載體組(p0.05)；HO-1組表達水平明顯高于siRNA組(p0.01),有統(tǒng)計學意義。 5.相同時相點比較,siRNA組Ntcp蛋白表達水平低于對照組和空載體組(p0.05);HO-1組Ntcp蛋白表達水平高于對照組和空載體組(p0.05)；HO-1組表達水平明顯高于siRNA組(p0.01),有統(tǒng)計學意義。 6.相同時相點比較,siRNA組免疫熒光雙染及氯醋酸酯酶染色上可見：大小膽管上皮細胞模糊,部分膽管基底膜脫落,周圍肝細胞松散,伴核變性,嚴重損傷表現；HO-1組損傷表現較輕,大小膽管上皮細胞清晰,基底膜的連續(xù)性可,膽管周圍肝細胞排列緊密,未見核變性。 結論： 1.大鼠肝臟熱缺血再灌注損傷模型是一種穩(wěn)定、可靠、簡便的模型,可操作性強。 2. Ad-HO-1能有效增加HO-1基因在大鼠肝臟的表達,而Ad-HO-1-siRNA能有效減少HO-1基因在大鼠肝臟的表達。 3.缺血再灌注會造成肝功能受損,Ad-HO-1可有效改善肝功能,減少促炎性細胞因子IL-6、TNF-a的表達,增加了保護性細胞因子HGF、IL-10的表達,減輕了大、小膽管的缺血再灌注損傷。 4.HO-1保護大鼠膽道缺血再灌注損傷的機制,可能與誘導膽鹽轉運蛋白高表達有關；膽鹽轉運蛋白高表達可以促進膽汁的轉運和排泄,從而減少具有較強細胞毒性的“毒性膽汁”形成,最終減少膽鹽對膽管的損傷。
[Abstract]:Purpose :

To investigate the effect of heme oxygenase - 1 ( HO - 1 ) on the expression of heme oxygenase - 1 ( HO - 1 ) in rat liver , and to explore its effect on ischemia - reperfusion injury ( IRI ) of rat biliary epithelial cells and its possible mechanism .

Method :

1 . A 70 % liver ischemia / reperfusion injury model was established by using the method reported by X et al .

2 . Ad - HO - 1 , Ad - HO - 1 - siRNA , empty adenovirus vector and physiological saline were used to induce liver ischemia / reperfusion injury model in rats . The rats were randomly divided into 4 groups : normal saline control group ( n = 32 ) ;
Empty carrier group ( n = 32 ) ;
HO - 1 group ( n = 32 ) , the dosage of injection was 2 脳 109 TU / L , the moi = 1 ;
The levels of alanine aminotransferase ( ALT ) , aspartate aminotransferase ( AST ) , total bilirubin ( TB ) and alkaline phosphatase ( ALP ) in serum were detected after liver ischemia and reperfusion .
The levels of IL - 6IL - 10 , HGF and TNF - a in serum were determined by ELISA .
Fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression of mRNA of bile salt output pump , the mRNA of multidrug resistance protein 2 , the expression of Ntcp mRNA and the expression of HO - 1 mRNA in liver tissue at 1d .
Western Blotting was used to detect the expression of Ntcp protein in liver tissue .
Immunofluorescent double staining and chloroacetate esterase staining were performed in the bile duct tissue of the liver and the hepatic portal , and the morphological structure of the bile duct and the surrounding liver was observed .

Results :

1 . The rat liver ischemia - reperfusion injury model was successfully performed in 128 cases , and the partial liver ischemia time was 45 min .

2 . Compared with control group and empty vector group , ALT , AST , TB and ALP were lower in HO - 1 group than those in control group and empty vector group ( P < 0.05 ) .
The HO - 1 group was significantly lower than that of siRNA group ( p0.01 ) .

3 . Compared with the control group and empty vector group , the serum HGF and IL - 10 of siRNA group were significantly lower than those in control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
The levels of HGF and IL - 10 in HO - 1 group were significantly higher than those in control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
In HO - 1 group , the levels of AIL - 6 and TNF - a were lower in HO - 1 group than in control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
The levels of IL - 6 and TNF - a in siRNA group were higher than those in control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
The HO - 1 group was significantly lower than that of siRNA group ( p0.01 ) .

4 . Compared with the control group and empty vector group , HO - 1 ( HO - 1 ) , Ntcp ( Ntcp ) , Bcl - 2 mRNA expression level in HO - 1 group were higher than those in control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
The mRNA expression level of HO - 1 , Ntcp , BIL - 2 mRNA in siRNA group was lower than that in control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
The expression level of HO - 1 group was significantly higher than that in siRNA group ( p0.01 ) .

5 . Compared with control group and empty vector group ( p < 0.05 ) , the expression level of Ntcp protein in siRNA group was lower than that of control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
The expression level of HO - 1 group was significantly higher than that in siRNA group ( p0.01 ) .

6 . In the same time phase point comparison , the siRNA group immunofluorescence double staining and chloroacetate esterase staining showed that the size of the bile duct epithelial cells was blurred , the basement membrane of the part was shed , the surrounding liver cells were loose , accompanied by nuclear degeneration and severe injury performance ;
The damage of HO - 1 group was light , the size of bile duct epithelial cells was clear , the continuity of basement membrane was close , and no nuclear degeneration was seen .

Conclusion :

1 . The model of rat liver heat ischemia - reperfusion injury is a stable , reliable and simple model with strong operability .

2 . Ad - HO - 1 can effectively increase the expression of HO - 1 gene in rat liver , while Ad - HO - 1 - siRNA can effectively reduce the expression of HO - 1 gene in rat liver .

3 . Ischemia / reperfusion may cause impaired liver function , and Ad - HO - 1 can effectively improve the liver function , reduce the expression of pro - inflammatory cytokines IL - 6 and TNF - a , increase the expression of the protective cytokines HGF and IL - 10 , and reduce the ischemia - reperfusion injury of large and small bile duct .

4 . HO - 1 protects the mechanism of rat biliary tract ischemia - reperfusion injury , which may be related to the induction of high expression of bile salt transporter .
The high expression of the bile salt transporter can promote the transport and excretion of bile , thereby reducing the formation of " toxic bile " with stronger cytotoxicity , and finally reducing the damage of the bile salt to the bile duct .
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363;R657.4

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 蔣清;胡懿惷;魏利成;;腫瘤壞死因子α在肢體缺血再灌注損傷軟骨中的表達[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年20期

2 代應輝,李壽玲,朱美玲,陳逖;大鼠高眼壓視網膜缺血再灌注損傷形態(tài)學改變[J];蚌埠醫(yī)學院學報;2005年05期

3 劉小南,霍婷婷,王為忠,陳彩平,管文賢,陳冬利;缺血預處理對大鼠移植胰缺血再灌注損傷的保護作用及其與細胞凋亡的相關性[J];世界華人消化雜志;2005年07期

4 劉瑋;張改華;陳晉文;謝仁厚;李華軍;杜文津;宋東林;;缺血再灌注損傷后大鼠腦神經細胞巢蛋白的表達[J];山東醫(yī)藥;2008年19期

5 謝朝暉;王春愛;李巖;王世太;賈國龍;;參附注射液對大鼠骨骼肌缺血再灌注后酶組織化學的影響[J];甘肅中醫(yī);2009年01期

6 吳婭娜;張克君;崔海寧;王正文;明松林;;PUMA在大鼠胰腺移植缺血-再灌注損傷中的意義[J];海南醫(yī)學院學報;2009年04期

7 趙廣闊;王心杰;張_g;;腎缺血再灌注損傷后內源性轉化生長因子β_1表達的動態(tài)研究[J];大連醫(yī)科大學學報;2009年03期

8 劉寶堂;雋兆東;陳峰;管英俊;;PI3K/AKT通路在刺五加保護大鼠缺血再灌注心肌細胞損傷中的作用[J];解剖科學進展;2010年03期

9 苗鋒;陳剛;陳志明;龐烈文;馬勤運;陳佶;朱勇俊;;烏司他丁對大鼠肺臟熱缺血再灌注損傷的保護作用[J];復旦學報(醫(yī)學版);2010年04期

10 田青水;朱興國;李德春;;P-選擇素在大鼠移植胰腺缺血再灌注損傷中的作用及P-選擇素單克隆抗體的保護作用[J];蘇州大學學報(醫(yī)學版);2007年05期

相關會議論文 前10條

1 劉修恒;陳暉;詹炳炎;周江橋;祝恒成;陳志遠;;缺血后處理對腎缺血再灌注損傷炎癥的影響[A];第十五屆全國泌尿外科學術會議論文集[C];2008年

2 劉敏;張煒;顧民;呂強;徐東亮;韓志堅;;Eritoran對大鼠腎臟缺血再灌注損傷的保護作用[A];第十六屆全國泌尿外科學術會議論文集[C];2009年

3 王飛;李金寶;鄧小明;;氫生理鹽水對大鼠急性腎臟缺血再灌注損傷的保護作用[A];第十五次長江流域麻醉學學術年會暨2010年中南六省麻醉學學術年會暨2010年湖北省麻醉學學術年會論文集[C];2010年

4 黃展勤;石剛剛;鄭錦鴻;劉冰;;氟哌啶醇季銨鹽衍生物(F_2)對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用及對大鼠心室肌細胞膜L-型鈣通道電流的影響[A];中國藥理學會第八次全國代表大會暨全國藥理學術會議論文摘要匯編[C];2002年

5 黃展勤;石剛剛;鄭錦鴻;劉冰;;氟哌啶醇季銨鹽衍生物(F_2)對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用及對大鼠心室肌細胞膜L-型鈣通道電流的影響[A];中國藥理學會第八次全國代表大會論文摘要集（第一部分）[C];2002年

6 李俊龍;孫則禹;陳明;張古田;顧曉箭;;紅景天甙對大鼠腎臟熱缺血再灌注損傷的保護作用的試驗研究[A];第五次全國中西醫(yī)結合泌尿外科學術會議論文匯編[C];2005年

7 王祖峰;溫端改;侯健全;嚴舂寅;歐陽駿;浦金賢;潘浩;;慢病毒介導的iNOS siRNA對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用[A];第十五屆全國泌尿外科學術會議論文集[C];2008年

8 忻元峰;汪進益;劉中民;范慧敏;劉泳;張濤;;腺苷預處理對大鼠心臟移植缺血再灌注損傷心肌保護作用研究[A];中華醫(yī)學會第七次全國胸心血管外科學術會議暨2007中華醫(yī)學會胸心血管外科青年醫(yī)師論壇論文集心血管外科分冊[C];2007年

9 王濤;文亮;熊建瓊;;烏斯他丁對缺血再灌注損傷大鼠腸黏膜免疫功能的影響[A];第十一次全國急診醫(yī)學學術會議暨中華醫(yī)學會急診醫(yī)學分會成立二十周年慶典論文匯編[C];2006年

10 杜霞;王敬萍;李保;;重組人腦利鈉肽通過死亡受體通路減少心肌細胞凋亡保護大鼠缺血再灌注損傷[A];第十三次全國心血管病學術會議論文集[C];2011年

相關重要報紙文章 前10條

1 ;關木通對大鼠致癌性的實驗研究[N];中國醫(yī)藥報;2003年

2 劉霞;誘導多功能干細胞讓小鼠長出大鼠胰腺[N];科技日報;2011年

3 ;丹參能加快放創(chuàng)復合傷大鼠創(chuàng)面愈合[N];中國中醫(yī)藥報;2005年

4 鄭健剛；杜元灝；石學敏;針刺能增加腦缺血大鼠腦血流量[N];中國醫(yī)藥報;2005年

5 ;新抗病毒抗生素17997在大鼠體內藥代動力學和組織分布研究[N];中國醫(yī)藥報;2003年

6 ;刺五加皂甙對大鼠血管性癡呆有防治作用[N];中國中醫(yī)藥報;2005年

7 ;中藥復方能逆轉腹主動脈縮窄大鼠心肌肥大[N];中國中醫(yī)藥報;2005年

8 孫忻;人類首次獲得克隆大鼠[N];科技日報;2003年

9 阿勝;死亡陰影下孕育生機無限[N];醫(yī)藥經濟報;2002年

10 程源;父母吸煙會導致嬰兒厭食[N];大眾衛(wèi)生報;2004年

相關博士學位論文 前10條

1 王夢]};Exendin-4對大鼠皮質神經元缺血再灌注損傷后內質網相關性細胞凋亡的影響[D];華中科技大學;2011年

2 牛英;缺血后處理對大鼠減體積肝移植術后移植肝保護作用的實驗研究[D];中南大學;2008年

3 徐世安;大鼠心肌缺血再灌注損傷中腫瘤壞死因子的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學;2002年

4 陳曉光;非創(chuàng)傷性肢體缺血預處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響及機制探討[D];中國醫(yī)科大學;2005年

5 金歡勝;HSP70介導腎臟缺血預適應保護作用的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學;2005年

6 梁啟明;刺五加皂苷B對大鼠心肌缺血再灌注和過氧化氫損傷心肌細胞凋亡的影響及機制[D];吉林大學;2010年

7 肖江衛(wèi);血紅素加氧酶-1在大鼠肝移植缺血再灌注損傷中的保護作用研究[D];重慶醫(yī)科大學;2005年

8 陳舒晨;缺血后適應基礎上骨髓間充質干細胞移植對大鼠移植肺缺血再灌注損傷的保護作用[D];福建醫(yī)科大學;2009年

9 李俊華;天然免疫分子HMGB1在腎臟缺血再灌注損傷和異種移植排斥反應中的作用研究[D];華中科技大學;2010年

10 劉鳳鳴;巰甲丙脯酸停跳液對低溫缺血再灌注離體兔心的保護作用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1992年

相關碩士學位論文 前10條

1 李新輝;缺血預處理對大鼠肝臟不同時限缺血再灌注損傷影響的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2006年

2 劉秉乾;誘導血紅素氧合酶-1的表達對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用[D];鄭州大學;2003年

3 張瑞麟;NF-κB抑制劑PDTC減輕大鼠胰腺缺血再灌注損傷的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學;2005年

4 張婷;骨髓間充質干細胞促進腎臟缺血再灌注損傷修復的實驗研究[D];蘇州大學;2006年

5 盧春茂;Rho激酶對離體大鼠缺血再灌注損傷心臟功能的影響[D];中國醫(yī)科大學;2009年

6 張q，

本文編號：2052529