本文選題：血紅素氧合酶-1 + 膽道��； 參考：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的： 本研究通過調(diào)節(jié)肝臟血紅素氧合酶-1(HO-1)的表達,來觀察其對肝臟膽鹽轉(zhuǎn)運蛋白表達的影響,探討其對大鼠膽道上皮細胞缺血再灌注損傷(IRI)的作用及其可能機制。 方法： 1.采用Fei X等報道的方法操作,建立70%肝臟缺血再灌注損傷模型。 2.使用化學(xué)合成的Ad-HO-1、Ad-HO-1-siRNA,以及空腺病毒載體和生理鹽水,經(jīng)陰莖背靜脈注射導(dǎo)入大鼠肝臟,24小時后開腹,建立大鼠肝臟缺血再灌注損傷模型。動物隨機分為4組：生理鹽水對照組(n=32)；空載體組(n=32)；HO-1組(n=32),注射劑量為2×109TU/只,MOI=1；siRNA組(n=32),注射劑量為2×109TU/只,MOI=1。各組再分別于再灌注損傷后1h、1d、1w和2w處死8只大鼠。檢測肝臟缺血再灌注后血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TB)、堿性磷酸酶(ALP)水平；ELISA法檢測IL-6IL-10、HGF、TNF-a在血清中的水平；熒光定量PCR檢測膽鹽輸出泵(Bsep) mRNA、多藥耐藥蛋白2(Mrp2) mRNA和�；悄懰徕c共轉(zhuǎn)運蛋白(Ntcp) mRNA的表達,以及肝組織1d時相點HO-1的mRNA表達；Western Blotting檢測肝組織Ntcp蛋白的表達；肝臟及肝門部膽管組織標(biāo)本行免疫熒光雙染及氯醋酸酯酶染色,觀察大小膽管及周圍肝組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果： 1.共成功實行大鼠肝臟缺血再灌注損傷模型128例,肝臟部分缺血時間為45min。 2.相同時相點比較,HO-1組血清ALT、AST、TB、ALP低于對照組和空載體組(p0.05)：siRNA組血清ALT、AST、TB、ALP含量高于對照組和空載體組(p0.05)；HO-1組明顯低于siRNA組(p0.01),有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.相同時相點比較, siRNA組血清HGF、IL-10明顯低于對照組和空載體組(p0.05)；HO-1組血清HGF、IL-10明顯高于對照組和空載體組(p0.05)；HO-1組明顯高于siRNA組(p0.01),有統(tǒng)計學(xué)意義。HO-1組血清AIL-6、TNF-a低于對照組和空載體組(p0.05)；siRNA組血清IL-6、TNF-a含量高于對照組和空載體組(p0.05)；HO-1組明顯低于siRNA組(p0.01),有統(tǒng)計學(xué)意義。 4.相同時相點比較,HO-1組HO-1、Ntcp、Bsep、Mrp2mRNA表達水平高于對照組和空載體組(p0.05)；siRNA組HO-1、Ntcp、Bsep、Mrp2mRNA表達水平低于對照組和空載體組(p0.05)；HO-1組表達水平明顯高于siRNA組(p0.01),有統(tǒng)計學(xué)意義。 5.相同時相點比較,siRNA組Ntcp蛋白表達水平低于對照組和空載體組(p0.05);HO-1組Ntcp蛋白表達水平高于對照組和空載體組(p0.05)；HO-1組表達水平明顯高于siRNA組(p0.01),有統(tǒng)計學(xué)意義。 6.相同時相點比較,siRNA組免疫熒光雙染及氯醋酸酯酶染色上可見：大小膽管上皮細胞模糊,部分膽管基底膜脫落,周圍肝細胞松散,伴核變性,嚴(yán)重損傷表現(xiàn)；HO-1組損傷表現(xiàn)較輕,大小膽管上皮細胞清晰,基底膜的連續(xù)性可,膽管周圍肝細胞排列緊密,未見核變性。 結(jié)論： 1.大鼠肝臟熱缺血再灌注損傷模型是一種穩(wěn)定、可靠、簡便的模型,可操作性強。 2. Ad-HO-1能有效增加HO-1基因在大鼠肝臟的表達,而Ad-HO-1-siRNA能有效減少HO-1基因在大鼠肝臟的表達。 3.缺血再灌注會造成肝功能受損,Ad-HO-1可有效改善肝功能,減少促炎性細胞因子IL-6、TNF-a的表達,增加了保護性細胞因子HGF、IL-10的表達,減輕了大、小膽管的缺血再灌注損傷。 4.HO-1保護大鼠膽道缺血再灌注損傷的機制,可能與誘導(dǎo)膽鹽轉(zhuǎn)運蛋白高表達有關(guān)；膽鹽轉(zhuǎn)運蛋白高表達可以促進膽汁的轉(zhuǎn)運和排泄,從而減少具有較強細胞毒性的“毒性膽汁”形成,最終減少膽鹽對膽管的損傷。
[Abstract]:Purpose :

To investigate the effect of heme oxygenase - 1 ( HO - 1 ) on the expression of heme oxygenase - 1 ( HO - 1 ) in rat liver , and to explore its effect on ischemia - reperfusion injury ( IRI ) of rat biliary epithelial cells and its possible mechanism .

Method :

1 . A 70 % liver ischemia / reperfusion injury model was established by using the method reported by X et al .

2 . Ad - HO - 1 , Ad - HO - 1 - siRNA , empty adenovirus vector and physiological saline were used to induce liver ischemia / reperfusion injury model in rats . The rats were randomly divided into 4 groups : normal saline control group ( n = 32 ) ;
Empty carrier group ( n = 32 ) ;
HO - 1 group ( n = 32 ) , the dosage of injection was 2 脳 109 TU / L , the moi = 1 ;
The levels of alanine aminotransferase ( ALT ) , aspartate aminotransferase ( AST ) , total bilirubin ( TB ) and alkaline phosphatase ( ALP ) in serum were detected after liver ischemia and reperfusion .
The levels of IL - 6IL - 10 , HGF and TNF - a in serum were determined by ELISA .
Fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression of mRNA of bile salt output pump , the mRNA of multidrug resistance protein 2 , the expression of Ntcp mRNA and the expression of HO - 1 mRNA in liver tissue at 1d .
Western Blotting was used to detect the expression of Ntcp protein in liver tissue .
Immunofluorescent double staining and chloroacetate esterase staining were performed in the bile duct tissue of the liver and the hepatic portal , and the morphological structure of the bile duct and the surrounding liver was observed .

Results :

1 . The rat liver ischemia - reperfusion injury model was successfully performed in 128 cases , and the partial liver ischemia time was 45 min .

2 . Compared with control group and empty vector group , ALT , AST , TB and ALP were lower in HO - 1 group than those in control group and empty vector group ( P < 0.05 ) .
The HO - 1 group was significantly lower than that of siRNA group ( p0.01 ) .

3 . Compared with the control group and empty vector group , the serum HGF and IL - 10 of siRNA group were significantly lower than those in control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
The levels of HGF and IL - 10 in HO - 1 group were significantly higher than those in control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
In HO - 1 group , the levels of AIL - 6 and TNF - a were lower in HO - 1 group than in control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
The levels of IL - 6 and TNF - a in siRNA group were higher than those in control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
The HO - 1 group was significantly lower than that of siRNA group ( p0.01 ) .

4 . Compared with the control group and empty vector group , HO - 1 ( HO - 1 ) , Ntcp ( Ntcp ) , Bcl - 2 mRNA expression level in HO - 1 group were higher than those in control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
The mRNA expression level of HO - 1 , Ntcp , BIL - 2 mRNA in siRNA group was lower than that in control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
The expression level of HO - 1 group was significantly higher than that in siRNA group ( p0.01 ) .

5 . Compared with control group and empty vector group ( p < 0.05 ) , the expression level of Ntcp protein in siRNA group was lower than that of control group and empty vector group ( p < 0.05 ) .
The expression level of HO - 1 group was significantly higher than that in siRNA group ( p0.01 ) .

6 . In the same time phase point comparison , the siRNA group immunofluorescence double staining and chloroacetate esterase staining showed that the size of the bile duct epithelial cells was blurred , the basement membrane of the part was shed , the surrounding liver cells were loose , accompanied by nuclear degeneration and severe injury performance ;
The damage of HO - 1 group was light , the size of bile duct epithelial cells was clear , the continuity of basement membrane was close , and no nuclear degeneration was seen .

Conclusion :

1 . The model of rat liver heat ischemia - reperfusion injury is a stable , reliable and simple model with strong operability .

2 . Ad - HO - 1 can effectively increase the expression of HO - 1 gene in rat liver , while Ad - HO - 1 - siRNA can effectively reduce the expression of HO - 1 gene in rat liver .

3 . Ischemia / reperfusion may cause impaired liver function , and Ad - HO - 1 can effectively improve the liver function , reduce the expression of pro - inflammatory cytokines IL - 6 and TNF - a , increase the expression of the protective cytokines HGF and IL - 10 , and reduce the ischemia - reperfusion injury of large and small bile duct .

4 . HO - 1 protects the mechanism of rat biliary tract ischemia - reperfusion injury , which may be related to the induction of high expression of bile salt transporter .
The high expression of the bile salt transporter can promote the transport and excretion of bile , thereby reducing the formation of " toxic bile " with stronger cytotoxicity , and finally reducing the damage of the bile salt to the bile duct .
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R363;R657.4

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6 張q，

本文編號：2052529