本文選題：IL-13 + IL-13Rα1��； 參考：《南昌大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的： 白細(xì)胞介素-13(Interleukine-13, IL-13)是調(diào)控肺纖維化的主要TH2細(xì)胞因子,IL-13與IL-13受體al(IL-13Rα1)、IL-4受體α(IL-4Rα)相結(jié)合產(chǎn)生促纖維化作用,IL-13受體α2(IL-13Rα2)以高親和力結(jié)合IL-13并抑制IL-13的促纖維化作用。本實驗檢測乙醇對人肺成纖維細(xì)胞(HFL-1)增殖以及HFL-1細(xì)胞IL-13受體基因表達(dá)的影響,研究乙醇和1L-13對HFL-1細(xì)胞Ⅰ、Ⅲ膠原基因(COL1A1、COL3A1 mRNA)的表達(dá)以及膠原蛋白合成的影響,從分子水平和蛋白水平探討乙醇對IL-13介導(dǎo)的肺纖維化的作用機(jī)制。 方法： 1.臺盼藍(lán)染色檢測HFL-1細(xì)胞活性。2.HE染色觀察HFL-1細(xì)胞形態(tài)。3.細(xì)胞代謝測定(MTT比色法)檢測乙醇和/或IL-13刺激HFL-1細(xì)胞后的增殖：細(xì)胞分組：①空白組②IL-13組(10ng/ml、20ng/ml和50 ng/m1)③乙醇組(25 mM、50 mM、100 mM、200 mM、400 mM、800 mM、1600 mM)④乙醇(25 mM、50 mM、100 mM、200 mM)和IL-13 (10ng/ml、20 ng/ml和50 ng/m1)混合組4.采用實時熒光定量RT-PCR (Real time RT-PCR)分析IL-13 (10 ng/ml、20 ng/ml和50 ng/m1)和/或乙醇(25 mM.50 mM、100 mM、200 mM)對HFL-1細(xì)胞刺激前后各組IL-4Ra mRNA, IL-13Rα1 mRNA和IL-13Ra2 mRNA以及COL1A1、COL3A1 mRNA表達(dá)的影響。5.ELISA方法檢測IL-13(10 ng/ml、20 ng/ml和50 ng/m1)和/或乙醇(25 mM、50 mM、100 mM、200 mM)對HFL-1細(xì)胞刺激前后各組細(xì)胞培養(yǎng)液中Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1.HFL-1細(xì)胞活性良好,低濃度乙醇(200 mM)對HFL-1細(xì)胞無毒性作用。2.HE染色觀察HFL-1細(xì)胞為長梭形,胞質(zhì)被染成粉紅色,胞核為橢圓形被染成藍(lán)色。3.低濃度乙醇(200 mM)不會影響HFL-1細(xì)胞的增殖,但與IL-13(10 ng/ml、20 ng/ml和50 ng/m1)共同刺激下對HFL-1細(xì)胞的增殖有顯著的促進(jìn)作用,IL-13(10 ng/ml、20 ng/m1和50 ng/m1)對HFL-1細(xì)胞有促增殖作用,且有濃度依賴性。4. Real time RT-PCR檢測結(jié)果顯示,低濃度乙醇(50 mM、100 mM、200 mM)刺激HFL-1細(xì)胞后IL-13Ral mRNA, IL-4Ra mRNA表達(dá)都顯著增強(qiáng),同時IL-13Rαt2 mRNA表達(dá)顯著減弱。低濃度乙醇(25 mM、50 mM、100 mM、200 mM)刺激HFL-1細(xì)胞前后COL1A1 mRNA、COL3A1 mRNA并無表達(dá)差異,IL-13(10ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml)刺激HFL-1細(xì)胞COL1A1 mRNA、COL3A1 mRNA表達(dá)顯著增強(qiáng),IL-13(10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml)和200 mM乙醇共同刺激HFL-1細(xì)胞后比單獨相應(yīng)濃度IL-13刺激后COL1A1 mRNA、COL3A1 mRNA表達(dá)顯著增強(qiáng)。5.ELISA檢測結(jié)果顯示：低濃度乙醇(25 mM、50 mM、100 mM和200 mM)刺激HFL-1細(xì)胞前后Ⅰ型膠原蛋白并無表達(dá)差異,IL-13(10 ng/m1、20 ng/m1、50ng/ml)和200 mM乙醇共同刺激HFL-1細(xì)胞后比單獨相應(yīng)濃度的IL-13刺激后Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)。 結(jié)論： 1.低濃度乙醇不影響HFL-1細(xì)胞的增殖,但與IL-13共同刺激下將對HFL-1細(xì)胞的增殖有顯著的促進(jìn)作用。2.低濃度乙醇刺激HFL-1細(xì)胞對IL-13Rαl mRNA、IL-4RαmRNA的表達(dá)起著上調(diào)作用,下調(diào)IL-13Rα2 mRNA的表達(dá)。3.低濃度乙醇刺激HFL-1細(xì)胞后COL1A1 mRNA、COL3A1 mRNA的表達(dá)無影響。4.IL-13能促進(jìn)HFL-1細(xì)胞的COL1A1 mRNA、COL3A1 mRNA的表達(dá)且有一定的濃度依賴性,IL-13和乙醇共同刺激HFL-1細(xì)胞可以顯著上調(diào)COL1A1 mRNA、COL3A1mRNA和Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)。
[Abstract]:Purpose :

The effects of ethanol and 1L - 13 on the proliferation of human lung fibroblasts ( HFL - 1 ) and the expression of IL - 13 receptor genes in HFL - 1 cells were investigated . The effects of ethanol and 1L - 13 on the expression of IL - 13 receptor genes in human lung fibroblasts ( HFL - 1 ) and the effects of ethanol and 1L - 13 on the expression of IL - 13 receptor genes in human lung fibroblasts ( HFL - 1 ) and the effects of ethanol on the expression of collagen gene ( COL1A1 , COL3A1 mRNA ) and collagen synthesis were investigated .

Method :

1 . The expression of IL - 13 ( 10 ng / ml , 20 ng / ml and 50 ng / ml ) and / or ethanol ( 25 mM , 50 mM , 100 mM , 200 mM , 400 mM , 800 mM , 100 mM , 200 mM ) and IL - 13 ( 10 ng / ml , 20 ng / ml , and 50 ng / ml ) were detected by trypan blue staining . The effects of IL - 13 ( 10 ng / ml , 20 ng / ml and 50 ng / ml ) and / or ethanol ( 25 mM . 50 mM , 100 mM , 200 mM ) on the expression of IL - 4Ra mRNA , IL - 13偽 1 mRNA and IL - 13Ra2 mRNA and COL1A1 , COL3A1 mRNA were analyzed by real time RT - PCR . Effects of 20 ng / ml and 50 ng / ml ) and / or ethanol ( 25 mM , 50 mM , 100 mM , 200 mM ) on the expression of type I collagen in each group of cells before and after stimulation of HFL - 1 cells .

Results :

1 . HFL - 1 cells were well - activated and low - concentration ethanol ( 200 mM ) had no toxic effect on HFL - 1 cells . IL - 13 ( 10 ng / ml , 20 ng / ml , 50 ng / ml ) stimulated the expression of COL1A1 mRNA and COL3A1 mRNA in HFL - 1 cells . The levels of IL - 13 ( 10 ng / ml , 20 ng / ml , 50 ng / ml ) and 200 mM ethanol stimulated HFL - 1 cells .

Conclusion :

2 . The expression of COL1A1 mRNA and COL3A1 mRNA in HFL - 1 cells stimulated by low - concentration ethanol could significantly increase the expression of COL1A1 mRNA , COL3A1 mRNA and the expression of COL1A1 mRNA , COL3A1 mRNA and type I collagen in HFL - 1 cells .
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2049690