本文選題：BLyS + 單鏈抗體��； 參考：《天津大學》2012年碩士論文

【摘要】：B淋巴細胞刺激因子（B lymphocyte stilulator，BLyS）是一種主要由巨噬細胞和樹突狀細胞產生的腫瘤壞死因子，廣泛參與了機體免疫，對外周B淋巴細胞的生存、成熟和分化，生發(fā)中心的形成，漿細胞抗體的分泌等生命過程有著至關重要的作用。BLyS的不正常表達與人類多種疾病相關，如免疫缺陷病，自身免疫性疾病和B細胞淋巴瘤等。研究表明自身免疫性疾病和血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者體內的BLyS水平明顯升高，而且BLyS信號的阻斷對此類疾病的發(fā)展有顯著的治療作用。單鏈抗體（ScFv）既具備抗原結合得特異性，又具有分子量小、穿透力強免疫原性低的特點，在免疫學和生物醫(yī)學領域有著廣闊的應用前景。因此抗BLyS單鏈抗體具有治療自身免疫性疾病和B淋巴瘤的潛在作用。 本課題研究方法：運用計算機模擬技術設計抗BLyS單鏈抗體的基因序列（VHL和MHL），用重疊PCR等方法構建重組質粒，借助原核表達系統(tǒng)表達并純化目的蛋白，通過ELISA技術初步檢測抗體的活性。 主要研究成果： （一）擴增了兩種抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)，并用重疊PCR方法構建了兩種單鏈抗體基因片段，并且分別添加了Myc標簽和Fc標簽，VHL-Myc大小為780bp，MHL-Fc大小為1500bp。 （二）構建了VHL-Myc-pET28a和MHL-Fc-pET28a表達載體，對蛋白表達的誘導條件進行了優(yōu)化，獲得了較高水平的表達。蛋白大量表達后利用Ni親和柱從包涵體中純化出兩種目的蛋白。 （三）體外活性檢測結果顯示VHL-Myc能夠與特異性BLyS結合，并且這種結合是劑量依賴的。
[Abstract]:B lymphocyte stimulating factor B lymphocyte stilulatorus is a tumor necrosis factor produced mainly by macrophages and dendritic cells. It is widely involved in the immune system, the survival, maturation and differentiation of peripheral B lymphocytes, and the formation of germinal centers. The abnormal expression of BLyS is related to a variety of human diseases, such as immune deficiency disease, autoimmune disease and B cell lymphoma. Studies have shown that the BLyS level in patients with autoimmune diseases and malignant tumors of the blood system is significantly increased, and the blocking of BLyS signals has a significant therapeutic effect on the development of these diseases. ScFv has the characteristics of low molecular weight, low immunogenicity and low molecular weight, so it has a wide application prospect in immunology and biomedicine. Therefore, anti-BLyS scFv has a potential role in the treatment of autoimmune diseases and B-lymphoma. Methods: the gene sequences of BLyS single chain antibody (BLyS) were designed by computer simulation. The recombinant plasmids were constructed by overlapping PCR, and the target protein was expressed and purified by prokaryotic expression system. The activity of antibody was detected by Elisa. The main results were as follows: (1) the heavy chain and light chain variable regions of the two antibodies were amplified, and two scFv gene fragments were constructed by overlapping PCR, and the size of VHL-Myc was 780bpMHL-Fc and the size of VHL-Fc was 1500bp. respectively. (2) VHL-Myc-pET28a and MHL-Fc-pET28a expression vectors were constructed. Two kinds of target proteins were purified from inclusion bodies by Ni affinity column. (3) the results of in vitro activity test showed that VHL-Myc could bind to specific BLyS in a dose-dependent manner.
【學位授予單位】：天津大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R392.1

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