本文選題：miR--p + -磷酸鞘氨醇　； 參考：《中國(guó)病理生理雜志》2017年07期

【摘要】：目的:觀察miR-542-5p對(duì)1-磷酸鞘氨醇(S1P)誘導(dǎo)的大鼠小腸隱窩上皮IEC-6細(xì)胞增殖的影響。方法:建立穩(wěn)定表達(dá)鞘氨醇激酶1(SphK1)的IEC-6細(xì)胞系(SphK1-IEC-C1和SphK1-IEC-C2),Western blot檢測(cè)SphK1蛋白表達(dá),放射性同位素示蹤法測(cè)定SphK1酶活性和S1P分泌,細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制生長(zhǎng)曲線觀察細(xì)胞增殖,流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期變化,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miR-542-5p表達(dá)。結(jié)果:與對(duì)照細(xì)胞相比,細(xì)胞系SphK1-IECC1和SphK1-IEC-C2中SphK1蛋白表達(dá)顯著升高,SphK1酶活性升高,細(xì)胞內(nèi)外S1P濃度升高,細(xì)胞生長(zhǎng)速度加快,細(xì)胞周期中S期細(xì)胞所占比例升高,miR-542-5p的表達(dá)量降低;在IEC-6細(xì)胞的培養(yǎng)液中加入S1P(0.5~10μmol/L),能顯著抑制miR-542-5p表達(dá);采用siRNA干擾降低IEC-6細(xì)胞的SphK1,可明顯升高miR-542-5p表達(dá)。升高SphK1-IEC-C1和SphK1-IEC-C2細(xì)胞中miR-542-5p水平,則可降低S期細(xì)胞比例,抑制細(xì)胞增殖。結(jié)論:S1P通過(guò)降低IEC-6細(xì)胞中miR-542-5p水平,引起細(xì)胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)換,促進(jìn)IEC-6細(xì)胞增殖。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of miR-542-5p on the proliferation of rat intestinal crypt epithelium IEC-6 cells induced by sphingosine 1-phosphate. Methods: SphK1 and SphK1 protein expression were detected by Western blot in IEC-6 cell lines expressing sphingosine kinase 1 and SphK1). SphK1 enzyme activity and S1P secretion were detected by radioisotope tracer assay. Cell count and growth curve were plotted to observe cell proliferation. Cell cycle changes were analyzed by flow cytometry and miR-542-5p expression was detected by real-time fluorescent quantitative PCR. Results: compared with control cells, the expression of SphK1 protein in SphK1-IECC1 and SphK1-IEC-C2 cells increased significantly, the activity of SphK1 enzyme increased, the concentration of S1P increased, the cell growth rate increased, and the expression of SphK1 protein increased in cell cycle. The expression of miR-542-5p in IEC-6 cells was significantly inhibited by adding 10 渭 mol 路L ~ (-1) of S1PU _ (0.5) in IEC-6 cell culture medium, and the expression of miR-542-5p in IEC-6 cells was significantly increased by using siRNA interference to decrease the expression of miR-542-5p in IEC-6 cells. The increase of miR-542-5p levels in SphK1-IEC-C1 and SphK1-IEC-C2 cells could decrease the proportion of S phase cells and inhibit the proliferation of SphK1-IEC-C2 cells. Conclusion by reducing the level of miR-542-5p in IEC-6 cells, the cell cycle changes from G1 phase to S phase and promotes the proliferation of IEC-6 cells.
【作者單位】： 新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室;中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【基金】：新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.2013211A072)
【分類(lèi)號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：2027801