血管內(nèi)皮生長因子在動脈粥樣硬化基礎(chǔ)上缺血性腦卒中模型大鼠腦組織中的表達(dá)研究
本文選題:腦梗死 + 動脈粥樣硬化動物模型; 參考:《山西醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文
【摘要】:目的探討血管內(nèi)皮生長因子基因及蛋白在動脈粥樣硬化基礎(chǔ)上缺血性腦卒中模型大鼠腦組織中的表達(dá)規(guī)律及意義。 方法大鼠被隨機(jī)分為空白對照組和模型組,后者制備動脈粥樣硬化和缺血性卒中模型,然后再分為動脈粥樣硬化模型假手術(shù)組(AS-sham)、動脈粥樣硬化模型缺血性腦卒中持續(xù)缺血(AS-SI)0.5、6、12、24h組。觀察主動脈根部及腦組織HE染色切片研究缺血性腦卒中和動脈粥樣硬化模型的組織學(xué)上的基本病理改變,運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測血管內(nèi)皮生長因子mRNA表達(dá)水平及其規(guī)律,免疫組織化學(xué)法被用于檢測血管內(nèi)皮生長因子蛋白的表達(dá)水平差異及其規(guī)律。計(jì)量資料結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0軟件。組間比較采用單因素方差分析,滿足方差齊性條件,多重比較采用LSD-t法;不滿足用Dunnett’sT3檢驗(yàn),差異以P0.05為標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果1.大體觀:腦組織隨著缺血時(shí)間的延長先出現(xiàn)水腫,后出現(xiàn)腦組織萎縮液化壞死;2.HE染色:隨著缺血時(shí)間的延長神經(jīng)元萎縮、壞死或者凋亡,組織出現(xiàn)液化壞死,,組織間壞死出現(xiàn)空白區(qū);3.RT-PCR及免疫組化檢測:各動脈粥樣硬化模型組與對照組比較、各持續(xù)缺血組與假手術(shù)組比較血管內(nèi)皮生長因子基因及蛋白表達(dá)均有明顯升高(P0.05),并隨時(shí)間發(fā)生規(guī)律性變化,即0.5h迅速升高,其峰值在6h出現(xiàn),12、24h后開始下降但仍較基線水平高。其中血管內(nèi)皮生長因子基因及其蛋白產(chǎn)物在持續(xù)缺血6h組達(dá)到峰值。模型組可見雙側(cè)大腦皮質(zhì)層、微血管周圍腦組織及海馬區(qū)細(xì)胞廣泛分布有陽性表達(dá)顆粒,細(xì)胞水平可見胞漿內(nèi)亦存在陽性表達(dá)顆粒。 結(jié)論1.固態(tài)高脂飼料可成功復(fù)制穩(wěn)定的動脈粥樣硬化大鼠模型,在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈可制備并發(fā)缺血性腦卒中的動脈粥樣硬化大鼠模型,該模型屬本實(shí)驗(yàn)課題首創(chuàng)。2.動脈粥樣硬化基礎(chǔ)上再發(fā)生缺血性腦卒中時(shí)兩種疾病對VEGF表達(dá)的調(diào)節(jié)存在協(xié)同效應(yīng),VEGF表達(dá)的時(shí)相及水平較兩種單純疾病時(shí)表達(dá)的時(shí)相更早,水平更強(qiáng)烈。3.VEGF的表達(dá)與機(jī)體系統(tǒng)炎癥的關(guān)系以及調(diào)節(jié)性機(jī)制需進(jìn)一步研究,同時(shí)能提供在研究動脈粥樣硬化基礎(chǔ)上并發(fā)缺血性腦卒中的發(fā)生、發(fā)展、治療及預(yù)后估計(jì)方面所需的理論模型。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) gene and protein in the brain of ischemic stroke rats on the basis of atherosclerosis. Methods Rats were randomly divided into blank control group and model group, the latter was used to establish atherosclerosis and ischemic stroke models, and then divided into the atherosclerosis model sham-operated group and the atherosclerotic model of ischemic stroke sustained ischemia. The histological changes of ischemic stroke and atherosclerosis model were studied by HE staining in the root of aorta and brain tissue. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT PCR) was used to detect the expression and regularity of vascular endothelial growth factor (VEGF) mRNA, and immunohistochemical method was used to detect the difference of expression level of vascular endothelial growth factor (VEGF) protein. The data were expressed as mean 鹵standard deviation x 鹵s, and SPSS 13.0 software was used to analyze the data. Single factor ANOVA was used to satisfy the condition of homogeneity of variance, and LSD-t method was used for multiple comparisons, and Dunnett-ST3 test was not satisfied. The difference was based on P05. Result 1. General observation: with the prolongation of ischemic time, brain tissue first appears edema, then brain tissue atrophy, liquefaction and necrosis. 2. He staining: with the prolongation of ischemic time, neuronal atrophy, necrosis or apoptosis, tissue liquefaction and necrosis, 3. RT-PCR and immunohistochemistry: the atherosclerosis model group was compared with the control group. Compared with sham operation group, the expression of VEGF gene and protein in each continuous ischemia group was significantly increased, and the expression of VEGF gene and protein increased regularly with time, that is, 0.5 h, the peak value began to decrease after 6 h and 1224 h, but still higher than baseline level. Vascular endothelial growth factor (VEGF) gene and its protein products reached the peak in 6 h ischemia group. In the model group, positive granules were found in bilateral cerebral cortex layer, brain tissue around microvessel and hippocampal area, and positive granules were also found in the cytoplasm of the model group. Conclusion 1. The stable rat model of atherosclerosis could be successfully established by solid high fat diet. On this basis, the rat model of atherosclerosis complicated with ischemic stroke could be made by further ligating bilateral common carotid artery. The model was the first one in this experiment. There is a synergistic effect on the regulation of VEGF expression between the two diseases on the basis of atherosclerosis. The time phase and level of VEGF expression are earlier than those of two simple diseases. The relationship between VEGF expression and systemic inflammation and its regulatory mechanism need to be further studied, which can provide the occurrence and development of ischemic stroke based on the study of atherosclerosis. Theoretical models needed for treatment and prognosis estimation.
【學(xué)位授予單位】:山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2012
【分類號】:R363.2
【共引文獻(xiàn)】
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本文編號:2026003
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