本文選題：分枝桿菌噬菌體 + 噬菌體重組　； 參考：《上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)》2017年07期

【摘要】：目的·構(gòu)建分枝桿菌噬菌體(TM4)與復(fù)蘇促進因子(Rpf)的重組體(TM4-RpfE),為聯(lián)合抗結(jié)核藥物實現(xiàn)殺滅結(jié)核休眠菌、縮短結(jié)核化療療程奠定實驗基礎(chǔ)。方法·電轉(zhuǎn)化法將pJV53質(zhì)粒轉(zhuǎn)入恥垢分枝桿菌,制備重組工程菌;提取TM4基因組DNA;重疊PCR擴增目的融合基因hsp60-RpfE,多步重疊PCR擴增插入長片段HHRH(homologous+hsp60-RpfE+homologous);電轉(zhuǎn)化法將噬菌體DNA與插入長片段HHRH共同轉(zhuǎn)入重組工程菌,挑取單噬菌斑進行PCR和測序驗證;SDS-PAGE分析重組噬菌體的蛋白表達。結(jié)果·重疊PCR擴增出全長901 bp大小的目的融合基因hsp60-RpfE和1 873 bp大小的插入長片段HHRH;PCR驗證重組后的噬菌斑,分別在955 bp和301 bp處出現(xiàn)特異性條帶;SDS-PAGE分析顯示重組型噬菌體在21 000處出現(xiàn)特異性蛋白條帶。結(jié)論·分枝桿菌噬菌體重組體TM4-RpfE構(gòu)建成功,初步驗證目的基因RpfE得到表達。
[Abstract]:Objective to construct the recombinant of Mycobacterium bacteriophage TM4) and the resuscitation promoter RpfE (TM4-RpfEN), so as to establish the experimental foundation for the combination of anti-tuberculosis drugs to kill dormancy bacteria of tuberculosis and shorten the course of tuberculosis chemotherapy. Methods the plasmid pJV53 was transferred into Mycobacterium smegmatis by electrical transformation to prepare recombinant engineering bacteria. The genomic DNA of TM4 was extracted, the fusion gene hsp60-RpfE was amplified by overlapping PCR, and the long fragment HHRHH homologous HSP60-RpfE homologousus was amplified by multi-step overlapping PCR. The protein expression of recombinant phage was analyzed by SDS-PAGE. Results the target fusion gene hsp60-RpfE with length of 901bp was amplified by overlapping PCR, and the inserted long fragment HHRHU of 1873 BP was amplified by PCR to verify the plaque of the recombinant phagocytic plaque. SDS-PAGE analysis of specific bands at 955 BP and 301 BP showed that the recombinant phage displayed specific protein bands at 21 000 sites. Conclusion Mycobacterium bacteriophage recombinant TM4-RpfE was successfully constructed and the expression of the target gene RpfE was preliminarily verified.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科;北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81570010)~~
【分類號】：R378.911

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 柳巖;江莉莎;姚義勇;曹俊;郭述良;;噬菌體TM4、Guo1和D29對靜止期結(jié)核菌裂解作用初步研究[J];中國人獸共患病學(xué)報;2016年01期

2 樊祥宇;謝建平;;分枝桿菌噬菌體重組系統(tǒng)及其應(yīng)用[J];中國生物工程雜志;2012年09期

3 張雪;溫廷益;;Red重組系統(tǒng)用于大腸桿菌基因修飾研究進展[J];中國生物工程雜志;2008年12期

【共引文獻】

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1 杜麗娟;楊婷;徐莉;邢愛英;劉忠泉;張宗德;郭述良;;分枝桿菌噬菌體重組體TM4-RpfE的構(gòu)建[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2017年07期

2 劉秋婷;田雨順;云龍;羅鵬;胡超群;;噬菌體基因組DNA快速提取方法[J];熱帶生物學(xué)報;2017年02期

3 南亞萍;周國標;袁林江;;多聚磷酸鹽激酶基因在污水生物除磷中的功能[J];環(huán)境科學(xué);2017年04期

4 田青;周鑫;羅燕;程建國;趙位;;林麝肺源致病性大腸桿菌O78株crl毒力基因缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2016年12期

5 謝曉蕾;陶明新;藺志杰;陳韻;夏頡;徐黎娟;李求春;焦新安;;腸炎沙門菌sipA基因缺失株C50336ΔsipA的構(gòu)建及鑒定[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2016年10期

6 周茜;鄭會明;劉輝;謝希賢;徐慶陽;張成林;陳寧;;增強乙醛酸循環(huán)對大腸桿菌合成L-蘇氨酸的影響[J];現(xiàn)代食品科技;2015年10期

7 陳芳紅;李濤;王慧;;腸出血性大腸桿菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)ATP水解酶escN基因突變株的構(gòu)建[J];生物技術(shù)通訊;2015年03期

8 王蓉;;快速敲除補回家蠶核型多角體病毒ORF29[J];浙江農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年10期

9 王歆瑋;任道元;高謙;牛辰;;分枝桿菌glpX基因的功能[J];微生物學(xué)報;2014年03期

10 張瑤;羅紫臣;高秋強;鮑杰;;構(gòu)建伴有β-葡萄糖苷酶表達的乙醇發(fā)酵大腸桿菌[J];生物工程學(xué)報;2013年09期

【二級參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 甘易玲;郭述良;;噬菌體TM4復(fù)蘇結(jié)核休眠菌的初步研究[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年01期

2 陳軍;陳麗峰;饒有益;王飛;肖勇;彭孝紅;;刃天青顯色法測定氟喹諾酮對結(jié)核桿菌的最小抑菌濃度[J];臨床血液學(xué)雜志(輸血與檢驗版);2011年02期

3 張雪;溫廷益;;Red重組系統(tǒng)用于大腸桿菌基因修飾研究進展[J];中國生物工程雜志;2008年12期

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本文編號：2013784