本文選題：志賀氏菌 + 侵襲性質(zhì)粒抗原H基因�。� 參考：《微生物學(xué)通報》2016年07期

【摘要】：【目的】將環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)(LAMP)與橫向流動試紙條(LFD)聯(lián)合應(yīng)用,建立一種可應(yīng)用于志賀氏菌快速檢測的LAMP-LFD技術(shù)。【方法】以福氏志賀氏菌的侵襲性質(zhì)�？乖璈(ipa H)基因為檢測靶標設(shè)計3對特異性引物(其中上游內(nèi)引物Sfl-ipa H-FIP由生物素標記),進行LAMP反應(yīng);同時設(shè)計1條異硫氰酸熒光素(FITC)標記的探針Sfl-ipa H-HP,與獲得的LAMP產(chǎn)物進行特異性雜交,雜交產(chǎn)物經(jīng)LFD完成檢測�！窘Y(jié)果】優(yōu)化后的LAMP反應(yīng)條件為63°C 40 min,加上LFD結(jié)果判讀共需50 min。LAMP-LFD方法能夠特異性檢測出福氏志賀氏菌,而對腸炎沙門氏菌等其它4種導(dǎo)致腹瀉的致病菌和創(chuàng)傷弧菌等5種常見食物源性致病菌,以及4株不同大腸桿菌的檢測結(jié)果呈陰性。該方法針對福氏志賀氏菌的檢測靈敏度為1.0×10~2 CFU/m L或4 CFU/反應(yīng),針對人工污染鯉魚腸組織的檢測靈敏度是5.0×10~2 CFU/m L,是以LAMP外引物Sfl-ipa H-F3/Sfl-ipa H-B3的常規(guī)PCR方法的100倍�！窘Y(jié)論】建立的LAMP-LFD技術(shù)具有操作簡單、檢測快速準確、檢測成本低等優(yōu)點,有望在志賀氏菌的常規(guī)監(jiān)測和即時檢測中被普及使用。
[Abstract]:[objective] to combine the ring mediated isothermal amplification (Lamp) technique with the lateral flow test strip (LFDs), A LAMP-LFD technique for rapid detection of Shigella flexneri was established. [methods] three pairs of specific primers (including upstream primer Sfl-ipa H-FIP) were designed based on Hapipa H, an invasive plasmid antigen of Shigella flexneri. Labeled with substance, lamp reaction was carried out. At the same time, a probe Sfl-ipa H-HPlabeled with fluorescein isothiocyanate was designed and hybridized specifically with the obtained lamp product. [results] the optimized conditions of lamp reaction were 63 擄C 40 min and 50 min. LAMP-LFD was used to detect Shigella flexneri specifically. The results were negative for 5 common foodborne pathogens such as Salmonella enteritidis and Vibrio vulnificus, and 4 strains of Escherichia coli. The sensitivity of this method for detection of Shigella flexneri was 1.0 脳 10 ~ 2 CFU / mL or 4 CFU / reaction. The sensitivity of detection for artificially contaminated carp intestinal tissue is 5.0 脳 10 ~ 2 CFU / mL, which is 100 times higher than that of conventional PCR method using lamp outer primer Sfl-ipa H-F3 / Sfl-ipa H-B3. [conclusion] the established LAMP-LFD technique has the advantages of simple operation, rapid and accurate detection, low detection cost, and so on. It is expected to be widely used in routine surveillance and immediate detection of Shigella.
【作者單位】： 寧波大學(xué)生物與海洋科學(xué)系;浙江省疾病預(yù)防控制中心;
【基金】：國家星火計劃(No.2014GA701007) 浙江省重大科技專項重點社會發(fā)展項目(No.2013C03045-1) 寧波市科技創(chuàng)新團隊項目(No.2015C110018) 寧波市科技富民項目(No.2016C10042) 寧波大學(xué)學(xué)科項目(No.XKL14D2083)~~
【分類號】：R378

【參考文獻】

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【二級參考文獻】

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【相似文獻】

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本文編號：2011943