發(fā)布時間：2018-06-11 20:59

  本文選題：神經(jīng)干細(xì)胞 + SHH信號通路　； 參考：《大連醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：SHH在細(xì)胞和組織中對細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期有著廣泛的影響。在神經(jīng)發(fā)育中,SHH調(diào)節(jié)神經(jīng)管[2]的圖式發(fā)育及神經(jīng)祖細(xì)胞的增值和分化。神經(jīng)干細(xì)胞是位于側(cè)腦室室下區(qū)和海馬齒狀回顆粒下區(qū)具有可再生和多向分化能力的祖細(xì)胞,可分化成神經(jīng)系統(tǒng)中的三系細(xì)胞:神經(jīng)元,星型膠質(zhì)細(xì)胞,少突膠質(zhì)細(xì)胞。最近研究發(fā)現(xiàn)在端腦中SHH對維持神經(jīng)祖細(xì)胞內(nèi)環(huán)境與神經(jīng)修復(fù)有重要作用,外源性SHH可引起神經(jīng)干細(xì)胞的增值。盡管各種細(xì)胞分裂素,神經(jīng)營養(yǎng)因子及其他分子可調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖,但是調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞增殖機(jī)制未被詳細(xì)闡明。 目前SHH導(dǎo)致的細(xì)胞增殖和瘤變的機(jī)制并不清楚。在大部分細(xì)胞中,SHH信號通路由SHH、Patched(Ptc)和Smoothed (Smo) 2個跨膜受體組成的受體復(fù)合物,蛋白激酶A及下游轉(zhuǎn)錄因子Gli家族(Glil、Gli2、Gli3)等組成。信號傳導(dǎo)時,SHH和Ptc結(jié)合,Ptc-Smo復(fù)合物解離,Smo進(jìn)入胞內(nèi),激活下游的轉(zhuǎn)錄因子Gli家族。 1999年,Rowitch等報道,在體內(nèi)脊髓前體細(xì)胞可通過SHH使腦室下區(qū)神經(jīng)前體細(xì)胞保持增值并抑制其分化。2003年,Lai, K等報道發(fā)現(xiàn)從成年大鼠海馬區(qū)分離的神經(jīng)前體細(xì)胞高表達(dá)SHH受體Patched,同時外源性的SHH可誘導(dǎo)神經(jīng)前體細(xì)胞呈SHH濃度依賴性增值。采用腺相關(guān)病毒載體轉(zhuǎn)染體內(nèi)海馬區(qū),神經(jīng)前體細(xì)胞較對照組可見有3.3倍的增值。2003年,Machold等基因敲除大鼠SHH基因?qū)е麓笫笪闯赡陼r就發(fā)育畸形,海馬區(qū)和腦室下區(qū)神經(jīng)前體細(xì)胞顯著減少。并且認(rèn)為腦室下區(qū)神經(jīng)前體細(xì)胞的減少歸因于細(xì)胞的程序化死亡。證實了SHH對神經(jīng)干細(xì)胞生態(tài)位的維持起到重要作用,激活SHH信號通路可使發(fā)育成熟的腦組織內(nèi)的神經(jīng)前體細(xì)胞增殖。 我們分離并純化大鼠腦室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞,提取RNA、反轉(zhuǎn)錄PCR得到SHH-N的cDNA,克隆入pSNAV2.0 - CMV-IRES-EGFP,包裝得到腺相關(guān)病毒rAAV SHH -N EGFP,感染神經(jīng)干細(xì)胞48h后采用實時定量PCR檢測SHH信號通路下游基因的mRNA水平變化。本實驗的結(jié)果表明(1)克隆得到SHH-N基因,測序結(jié)果與NCBI報道序列一致。(2)成功構(gòu)建pSNAV2.0-CMV SHH N IRES-EGFP表達(dá)載體并鑒定,包裝得到rAAV-SHH-N-EGFP。(3)實時定量PCR分析rAAV SHH-N- EGFP感染神經(jīng)干細(xì)胞48h后, rAAV-SHH-N-EGFP處理組較感染rAAV-EGFP的對照組,Gli1和N-myc的mRNA水平上調(diào)。 2003年kenney[21]等報道在顆粒神經(jīng)前體細(xì)胞中過表達(dá)N-myc可使G1期細(xì)胞周期蛋白表達(dá)上調(diào),但顆粒神經(jīng)前體細(xì)胞的增值并不依賴SHH信號通路激活。同時在體外培養(yǎng)的顆粒神經(jīng)前體細(xì)胞中,激活SHH信號通路同時加入Myc拮抗物,可減少細(xì)胞增殖。由此,認(rèn)為在顆粒神經(jīng)前體細(xì)胞中,N-myc是SHH信號通路的靶基因,并調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的蛋白的表達(dá)。 總之,我們認(rèn)為在神經(jīng)干細(xì)胞中,N-myc是SHH信號通路的直接靶基因。由SHH過表達(dá)刺激后引起的N-myc轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)上調(diào),N-myc可能是SHH促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增值重要調(diào)控分子。盡管N-myc與Gli1的調(diào)控關(guān)系并未闡明,N-myc可能不依賴Gli1直接調(diào)控。N-myc在SHH信號通路的中調(diào)控細(xì)胞增殖的作用需要進(jìn)一步研究。
[Abstract]:SHH has a wide range of effects on cell proliferation and cell cycle in cells and tissues . In the development of neural stem , SHH regulates the pattern development of neural stem cells and the proliferation and differentiation of neural progenitor cells .

In most of the cells , the SHH signal pathway consists of a receptor complex consisting of SHH , Patched ( Ptc ) , and Smo ( Smo ) 2 transmembrane receptors , protein kinase A and downstream transcription factor Gli family ( Glil , Gli2 , Gli3 ) and the like . During signal transduction , SHH and Ptc bind to the Ptc - Smo complex , and Smo enter the cell to activate the downstream transcription factor Gli family .

In 2003 , the neural progenitor cells isolated from hippocampus of adult rats were observed to express SHH receptor Patched . At the same time , exogenous SHH could induce the proliferation of neural precursor cells in the hippocampus of adult rats .

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本文編號：2006677