本文選題：膽固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白 + IL-β　； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年13期

【摘要】：目的探討膽固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白(sterol regulatory element binding proteins cleavage-activating protein,SCAP)功能失調(diào)促進(jìn)THP-1源性巨噬細(xì)胞炎癥小體活化及IL-1β成熟的分子機(jī)制。方法采用基因轉(zhuǎn)染方法在THP-1源性巨噬細(xì)胞中過表達(dá)SCAP,結(jié)合使用P2X7受體(P2X7 receptor,P2X7R)激動劑ATP(5 mmol/L)或抑制劑A438079(100μmol/L)處理THP-1源性巨噬細(xì)胞,將細(xì)胞分為:(1)對照組、(2)ATP處理組、(3)A438079處理組、(4)ATP+A438079組、(5)過表達(dá)SCAP組、(6)過表達(dá)SCAP+ATP組、(7)過表達(dá)SCAP+A438079組、(8)過表達(dá)SCAP+ATP+A438079組。RTPCR檢測過表達(dá)SCAP以及激動或抑制P2X7R對P2X7R、pro-IL-1β、NLRP3、pro-caspase-1基因表達(dá)水平的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面P2X7R的表達(dá)。Western blot檢測SCAP、pro-IL-1β、NLRP3、caspase-1(p20)以及培養(yǎng)上清中IL-1β的蛋白水平。同一實(shí)驗(yàn)在細(xì)胞水平重復(fù)4次。結(jié)果 (1)過表達(dá)SCAP組與對照組比較,其pro-IL-1β、P2X7R基因表達(dá)水平顯著升高(P0.01),細(xì)胞表面P2X7R表達(dá)明顯上調(diào)。(2)P2X7R激動劑ATP與抑制劑A438079對THP-1源性巨噬細(xì)胞SCAP及P2X7R m RNA表達(dá)無影響(P0.05)。P2X7R激動劑ATP能夠顯著促進(jìn)THP-1源性巨噬細(xì)胞pro-IL-1βm RNA表達(dá)(P0.05),在過表達(dá)SCAP基礎(chǔ)上激動P2X7R能夠進(jìn)一步激活pro-IL-1β基因轉(zhuǎn)錄(P0.01),同時顯著促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)pro-IL-1β剪切成熟并向細(xì)胞外分泌(P0.01),抑制P2X7R活性并不影響過表達(dá)SCAP致pro-IL-1β表達(dá)上調(diào)的作用,但將減少上清中成熟IL-1β的含量。過表達(dá)SCAP并不影響NLRP3及caspase-1表達(dá)(P0.05),但在過表達(dá)SCAP基礎(chǔ)上充分激動P2X7R將顯著上調(diào)NLRP3及caspase-1基因及蛋白水平(P0.01),上述變化能夠被P2X7R抑制劑A438079抵消。結(jié)論膽固醇敏感器SCAP功能失調(diào)能夠促進(jìn)THP-1源性巨噬細(xì)胞內(nèi)pro-IL-1β表達(dá),同時通過上調(diào)細(xì)胞表面P2X7R表達(dá)激活NLRP3炎癥小體,促進(jìn)pro-IL-1β成熟及其向細(xì)胞外分泌。
[Abstract]:Objective to investigate the molecular mechanism of the dysfunction of cholesterol regulation original binding protein cleavage activator protein (regulatory element binding proteins cleavage-activating) to promote the activation of inflammatory corpuscles and the maturation of IL-1 尾 in THP-1 derived macrophages. Methods THP-1 derived macrophages were overexpressed by gene transfection and treated with P2X7 receptor P2X7 receptor P2X7R agonist (5 mmol / L) or inhibitor A438079 (100 渭 mol / L). The cells were divided into two groups: 1) the control group was divided into two groups: the control group was treated with A438079, and the control group was treated with A438079. The effect of overexpression of SCAP A438079 on the gene expression of P2X7Rpro-IL-1 尾 -NLRP3pro-caspase-1 in SCAP A438079 group was detected by RT PCR, and the expression of P2X7Rpro-IL-1 尾 -NLRP3pro-caspase-1 gene in SCAP A438079 group was detected by RT PCR. The expression of SCAP ATP A438079 was also detected by RT PCR. The effect of overexpression or inhibition of P2X7Rpro-IL-1 尾 -NLRP3pro-caspase-1 gene on the expression of P2X7Rpro-IL-1 尾 -NLRP3pro-caspase-1 gene was detected. Flow cytometry was used to detect the expression of P2X7R on the cell surface. Western blot was used to detect the protein level of IL-1 尾 in the culture supernatant. The same experiment was repeated 4 times at the cell level. Results 1) the overexpression of SCAP group was compared with that of control group. Its pro-IL-1 尾 -P2X7R gene expression level was significantly increased, and the expression of P2X7R was up-regulated on the surface of THP-1 macrophages. ATP and A438079 had no effect on the expression of SCAP and P2X7R mRNA in THP-1 derived macrophages. P0.05N. P2X7R agonist ATP could significantly promote THP-1 derived macrophages. The overexpression of p0.05R in pro-IL-1 尾 mRNA stimulated P2X7R on the basis of overexpression of SCAP. P2X7R could further activate pro-IL-1 尾 transcriptional gene P0.01a, and promote pro-IL-1 尾 shearing maturation and exocrine P0.01T significantly. Inhibition of P2X7R activity did not affect the up-regulation of pro-IL-1 尾 expression induced by overexpression of SCAP. However, the content of mature IL-1 尾 in the supernatant was decreased. Overexpression of NLRP3 and caspase-1 did not affect the expression of P0.05P, but the overexpression of P2X7R could significantly up-regulate the level of NLRP3 and caspase-1 gene and protein, which could be counteracted by P2X7R inhibitor A438079. Conclusion the dysfunction of cholesterol sensor SCAP can promote pro-IL-1 尾 expression in THP-1 derived macrophages, and activate NLRP3 inflammatory corpuscles by up-regulating P2X7R expression on the surface of THP-1 macrophages, thus promoting pro-IL-1 尾 maturation and exocrine secretion.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81500341)~~
【分類號】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2002150