本文選題：牛IFN-γ + 單克隆抗體�。� 參考：《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：γ-干擾素(IFN-γ)主要是在特定的抗原、有絲分裂原的刺激下由活化T淋巴細(xì)胞或NK細(xì)胞產(chǎn)生的一類具有廣譜抗病毒免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性的糖蛋白。國(guó)內(nèi)外在牛IFN-γ的研究和應(yīng)用方面的工作已經(jīng)開展很多,但不論是對(duì)免疫細(xì)胞功能及機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答方面的研究,還是對(duì)疾病狀態(tài)下IFN-γ產(chǎn)生水平的判定,都需要一種簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)手段。應(yīng)用牛IFN-γ單克隆抗體作為研究、檢測(cè)IFN-γ的手段,在免疫機(jī)制的研究、免疫功能檢測(cè)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。 本研究用原核表達(dá)的重組牛IFN-γ(rHis-BoIFN-γ)免疫6周齡BALB/c雌性小鼠,免疫3次后取其脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合。用建立的間接ELISA方法篩選陽性雜交瘤細(xì)胞,經(jīng)3~5次亞克隆,最終獲得12株能穩(wěn)定分泌抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞株。亞類鑒定結(jié)果顯示12株雜交瘤細(xì)胞均為IgG,其中5株為IgG1,3株為IgG2a,4株為IgG2b。12株雜交瘤細(xì)胞在體外具有穩(wěn)定分泌抗BoIFN-γ單克隆抗體的能力。Western-blot及間接ELISA證明12株單抗均可特異性的結(jié)合rBoIFN-γ蛋白。通過間接免疫熒光顯示,12株單抗均與真核細(xì)胞BHK21表達(dá)的rBoIFN-γ反應(yīng)產(chǎn)生熒光反應(yīng),證明了單抗能夠與真核細(xì)胞產(chǎn)生的BoIFN-γ反應(yīng),證實(shí)了單抗的特異性。ELISA疊加試驗(yàn)表明,3C2與1H4、1G6與1G4針對(duì)不同表位,1A10、1B2、2B9、3C4 4株和1C1與1G6、1G4與3C2、1A10與1G8針對(duì)相同或相近的表位。為利用單克隆抗體建立檢測(cè)BoIFN-γ抗原捕獲ELISA方法診斷牛疫病,及重組BoIFN-γ的親和層析純化提供了物質(zhì)材料,為深入研究BoIFN-γ單抗在牛臨床免疫學(xué)方面的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Interferon 緯 (IFN- 緯) is a class of glycoproteins with broad spectrum antiviral immunomodulation and other biological activities produced by activated T lymphocytes or NK cells stimulated by specific antigens and mitogen. A lot of work has been done on the research and application of bovine IFN- 緯 at home and abroad, but it is necessary to study the function of immune cells and the cellular immune response of organism, and to judge the level of IFN- 緯 production under the condition of disease. Rapid detection. The monoclonal antibody against bovine IFN- 緯 was used as a method to detect IFN- 緯. It has been widely used in the study of immune mechanism and immune function. In this study, recombinant bovine IFN- 緯 rHis-BoIFN- 緯 was used to immunize 6-week-old BALBP / c female mice with recombinant bovine IFN- 緯 rHis-BoIFN- 緯. The spleen cells and myeloma cells SP2 / 0 were harvested for fusion after 3 times immunization. The positive hybridoma cells were screened by indirect Elisa. After 3 subclones, 12 positive hybridoma cell lines were obtained which could secrete antibodies stably. The results of subclass identification showed that all 12 hybridoma cells were IgG, of which 5 were IgG1G 1, 3 were IgG2b.12 hybridoma cells had the ability to secrete monoclonal antibody against BoIFN- 緯 stably in vitro. Western-blot and indirect Elisa showed that 12 McAbs could be specific. Sex binding rBoIFN- 緯 protein. The results of indirect immunofluorescence showed that all 12 McAbs reacted with rBoIFN- 緯 expressed in eukaryotic cell BHK21, which proved that McAb could react with BoIFN- 緯 produced by eukaryotic cells. The specificity of the McAbs was confirmed by Elisa superposition test. The results showed that 3C2 and 1H4P1G6 and 1G4 were targeted at the same or close epitopes of 1A101B2O2B9O3C4 and 1C1 and 1G6G4 and 3C2O1A10 against the same or similar epitopes of 1G8. It provides a material for the establishment of monoclonal antibody to detect BoIFN- 緯 antigen capture Elisa and the purification of recombinant BoIFN- 緯 by affinity chromatography. It lays a foundation for further study on the application of BoIFN- 緯 monoclonal antibody in bovine clinical immunology.
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1994452