本文選題：MDSCs + IGF-1��； 參考：《吉林大學》2011年碩士論文

【摘要】：有關研究表明,肌源性干細胞(muscle derived stem cells, MDSCs)可能是一種新的骨骼肌源性成體干細胞,在組織工程和基因治療中具有廣泛的應用前景。目前,MDSCs的研究存在許多熱點問題,如何獲取滿足實驗及將來臨床所需的MDSCs數(shù)量就是其中一個亟待解決的難題。許多學者認為利用生長因子擴增的方法是一種良好的選擇,有關研究正在進行中。本文進行的有關研究,旨在進一步探討MDSCs的擴增條件,為有關研究與應用奠定實驗基礎。本實驗通過酶消化法分離大鼠MDSCs,再通過密度梯度離心法和差速貼壁法純化,然后將獲取的MDSCs進行體外培養(yǎng),并通過免疫細胞化學法(desmin、Sca-1)對所獲得的細胞進行鑒定。最后通過MTT法檢測不同濃度(6.25、12.5、25、50、100ng/ml)的IGF-1和CNTF單獨應用96h以及二者聯(lián)合作用(100ng/ml)24h、48h、72h和96h的光吸收值(OD)。所得數(shù)據(jù)通過SPSS13統(tǒng)計軟件包進行分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示,組間比較采用方差分析,兩兩比較采用Tukey’s法, P值0.05為有統(tǒng)計學意義。結果表明： 1.實驗組(分別加入不同濃度的IGF-1和CNTF)的光吸收值(OD)均高于陰性對照組,但在6.25ng/ml組,CNTF和IGF-1對MDSCs的促增殖效應不顯著。在12.5ng/ml組,兩種因子對MDSCs的促增殖效應明顯增強(P0.05)；但二者的促增殖效應沒有明顯差異。在25ng/ml組,CNTF和IGF-1對MDSCs的促增殖作用不僅進一步增強,而且兩者間存在顯著性差異(P0.05)。在50ng和100ng/ml組,CNTF和IGF-1的促MDSCs增殖效應均接近頂峰,并出現(xiàn)平臺現(xiàn)象。 2.隨著培養(yǎng)時間的延長,不同時間點的光吸收值出現(xiàn)明顯差異。以陰性對照組為參照,在體外培養(yǎng)過程中出現(xiàn)顯著性促增殖效應(P0.05)的時間分別為：96h(IGF-1組)、72h (CNTF組)、48h (IGF-1+CNTF組)。24h內,實驗因素的促增值效應不明顯,不存在顯著性差異。 3.在48h-96h期間,聯(lián)合組(IGF-1和CNTF)促MDSCs的增殖效應最強,并與其它實驗組間存在顯著差異(P0.05) 4.免疫細胞化學結果顯示：培養(yǎng)4d,呈Sca-1陽性反應的MDSCs較多,陽性率達90%。而Desmin陽性反應的MDSCs數(shù)量較少。 本實驗提示：CNTF和IGF-1均具有一定的促大鼠MDSCs增殖效應,而且存在協(xié)同增效現(xiàn)象。但是單獨作用時,二者促MDSCs增殖的顯效時間存在顯著差異,而且在6.25ng/ml, 12.5ng/ml,25ng/ml,50ng/ml組,促MDSCs增殖作用還呈濃度依賴性。有關作用機制至今還不清楚。
[Abstract]:It is suggested that muscle derived stem cells, MDSCs) may be a new type of skeletal muscle derived adult stem cells, which may be widely used in tissue engineering and gene therapy. At present, there are many hot problems in the research of MDSCs, and how to obtain the quantity of MDSCs needed in the experiment and in the future is one of the problems to be solved urgently. Many scholars believe that the method of growth factor amplification is a good choice. The purpose of this paper is to further study the conditions of MDSCs amplification, and to lay an experimental foundation for the study and application. Rat MDSCs were isolated by enzyme digestion and purified by density gradient centrifugation and differential adherence method. The obtained MDSCs was cultured in vitro and identified by immunocytochemical method (Sca-1). Finally, IGF-1 and CNTF with different concentrations of 6.25g / ml (12.5ng / ml) and CNTF (50ng / ml) were detected by MTT method for 96h alone, and the optical absorption values of 100ng / ml / ml ~ (24) h ~ (24) h ~ (48) h ~ (72) h ~ (-1) ~ 96 h ~ (-1) were determined. The data were analyzed by SPSS13 statistical software package, the data were expressed as mean 鹵standard deviation, the analysis of variance was used in the comparison between groups, and the Tukey's method was used in the pairwise comparison (P < 0. 05). The results show that: 1. The light absorption values of the experimental group (adding different concentrations of IGF-1 and CNTF) were higher than those of the negative control group, but the proliferation effect of CNTF and IGF-1 on MDSCs was not significant in the 6.25ng/ml group. In 12.5ng/ml group, the proliferative effect of two kinds of factors on MDSCs was significantly enhanced, but there was no significant difference between them. In 25ng/ml group, the effects of CNTF and IGF-1 on the proliferation of MDSCs were not only further enhanced, but also significantly different between the two groups (P 0.05). In both 50ng and 100ng/ml groups, the proliferative effect of CNTF and IGF-1 on MDSCs was near the peak, and the phenomenon of platform appeared. 2. With the extension of culture time, the light absorption values at different time points were obviously different. Taking negative control group as reference, the time of significant proliferative effect (P0.05) appeared in vitro culture process was 10 / 96h / h IGF-1 group respectively. The effect of the experimental factors was not obvious and there was no significant difference within 48 h and 24 h after treatment with IGF-1 CNTF group (n = 72 h) and IGF-1 / IGF-1 group (P < 0.05), respectively, and there was no significant difference between the experimental factors and the control group (P < 0.05). 3. During 48h-96h, IGF-1 and CNTF-1 had the strongest proliferative effect on MDSCs, and there was significant difference with other experimental groups (P0.05). 4. The results of immunocytochemistry showed that there were more MDSCs with Sca-1 positive reaction at 4 days, and the positive rate was 90. However, the number of Desmin positive MDSCs was relatively small. The results showed that both IGF-1 and IGF-1 could promote the proliferation of MDSCs in rats, and there was a synergistic effect. However, there was a significant difference between the two groups in promoting the proliferation of MDSCs in a dose-dependent manner in the 6.25ng / ml, 12.5ng / ml, 25ng / ml and 50ng / ml groups. The mechanism of action is still unclear.
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R329.1

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