本文選題：MDSCs + IGF-1�。� 參考：《吉林大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：有關(guān)研究表明,肌源性干細(xì)胞(muscle derived stem cells, MDSCs)可能是一種新的骨骼肌源性成體干細(xì)胞,在組織工程和基因治療中具有廣泛的應(yīng)用前景。目前,MDSCs的研究存在許多熱點(diǎn)問(wèn)題,如何獲取滿足實(shí)驗(yàn)及將來(lái)臨床所需的MDSCs數(shù)量就是其中一個(gè)亟待解決的難題。許多學(xué)者認(rèn)為利用生長(zhǎng)因子擴(kuò)增的方法是一種良好的選擇,有關(guān)研究正在進(jìn)行中。本文進(jìn)行的有關(guān)研究,旨在進(jìn)一步探討MDSCs的擴(kuò)增條件,為有關(guān)研究與應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)酶消化法分離大鼠MDSCs,再通過(guò)密度梯度離心法和差速貼壁法純化,然后將獲取的MDSCs進(jìn)行體外培養(yǎng),并通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)法(desmin、Sca-1)對(duì)所獲得的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。最后通過(guò)MTT法檢測(cè)不同濃度(6.25、12.5、25、50、100ng/ml)的IGF-1和CNTF單獨(dú)應(yīng)用96h以及二者聯(lián)合作用(100ng/ml)24h、48h、72h和96h的光吸收值(OD)。所得數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS13統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用方差分析,兩兩比較采用Tukey’s法, P值0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明： 1.實(shí)驗(yàn)組(分別加入不同濃度的IGF-1和CNTF)的光吸收值(OD)均高于陰性對(duì)照組,但在6.25ng/ml組,CNTF和IGF-1對(duì)MDSCs的促增殖效應(yīng)不顯著。在12.5ng/ml組,兩種因子對(duì)MDSCs的促增殖效應(yīng)明顯增強(qiáng)(P0.05)；但二者的促增殖效應(yīng)沒(méi)有明顯差異。在25ng/ml組,CNTF和IGF-1對(duì)MDSCs的促增殖作用不僅進(jìn)一步增強(qiáng),而且兩者間存在顯著性差異(P0.05)。在50ng和100ng/ml組,CNTF和IGF-1的促M(fèi)DSCs增殖效應(yīng)均接近頂峰,并出現(xiàn)平臺(tái)現(xiàn)象。 2.隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),不同時(shí)間點(diǎn)的光吸收值出現(xiàn)明顯差異。以陰性對(duì)照組為參照,在體外培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)顯著性促增殖效應(yīng)(P0.05)的時(shí)間分別為：96h(IGF-1組)、72h (CNTF組)、48h (IGF-1+CNTF組)。24h內(nèi),實(shí)驗(yàn)因素的促增值效應(yīng)不明顯,不存在顯著性差異。 3.在48h-96h期間,聯(lián)合組(IGF-1和CNTF)促M(fèi)DSCs的增殖效應(yīng)最強(qiáng),并與其它實(shí)驗(yàn)組間存在顯著差異(P0.05) 4.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示：培養(yǎng)4d,呈Sca-1陽(yáng)性反應(yīng)的MDSCs較多,陽(yáng)性率達(dá)90%。而Desmin陽(yáng)性反應(yīng)的MDSCs數(shù)量較少。 本實(shí)驗(yàn)提示：CNTF和IGF-1均具有一定的促大鼠MDSCs增殖效應(yīng),而且存在協(xié)同增效現(xiàn)象。但是單獨(dú)作用時(shí),二者促M(fèi)DSCs增殖的顯效時(shí)間存在顯著差異,而且在6.25ng/ml, 12.5ng/ml,25ng/ml,50ng/ml組,促M(fèi)DSCs增殖作用還呈濃度依賴性。有關(guān)作用機(jī)制至今還不清楚。
[Abstract]:It is suggested that muscle derived stem cells, MDSCs) may be a new type of skeletal muscle derived adult stem cells, which may be widely used in tissue engineering and gene therapy. At present, there are many hot problems in the research of MDSCs, and how to obtain the quantity of MDSCs needed in the experiment and in the future is one of the problems to be solved urgently. Many scholars believe that the method of growth factor amplification is a good choice. The purpose of this paper is to further study the conditions of MDSCs amplification, and to lay an experimental foundation for the study and application. Rat MDSCs were isolated by enzyme digestion and purified by density gradient centrifugation and differential adherence method. The obtained MDSCs was cultured in vitro and identified by immunocytochemical method (Sca-1). Finally, IGF-1 and CNTF with different concentrations of 6.25g / ml (12.5ng / ml) and CNTF (50ng / ml) were detected by MTT method for 96h alone, and the optical absorption values of 100ng / ml / ml ~ (24) h ~ (24) h ~ (48) h ~ (72) h ~ (-1) ~ 96 h ~ (-1) were determined. The data were analyzed by SPSS13 statistical software package, the data were expressed as mean 鹵standard deviation, the analysis of variance was used in the comparison between groups, and the Tukey's method was used in the pairwise comparison (P < 0. 05). The results show that: 1. The light absorption values of the experimental group (adding different concentrations of IGF-1 and CNTF) were higher than those of the negative control group, but the proliferation effect of CNTF and IGF-1 on MDSCs was not significant in the 6.25ng/ml group. In 12.5ng/ml group, the proliferative effect of two kinds of factors on MDSCs was significantly enhanced, but there was no significant difference between them. In 25ng/ml group, the effects of CNTF and IGF-1 on the proliferation of MDSCs were not only further enhanced, but also significantly different between the two groups (P 0.05). In both 50ng and 100ng/ml groups, the proliferative effect of CNTF and IGF-1 on MDSCs was near the peak, and the phenomenon of platform appeared. 2. With the extension of culture time, the light absorption values at different time points were obviously different. Taking negative control group as reference, the time of significant proliferative effect (P0.05) appeared in vitro culture process was 10 / 96h / h IGF-1 group respectively. The effect of the experimental factors was not obvious and there was no significant difference within 48 h and 24 h after treatment with IGF-1 CNTF group (n = 72 h) and IGF-1 / IGF-1 group (P < 0.05), respectively, and there was no significant difference between the experimental factors and the control group (P < 0.05). 3. During 48h-96h, IGF-1 and CNTF-1 had the strongest proliferative effect on MDSCs, and there was significant difference with other experimental groups (P0.05). 4. The results of immunocytochemistry showed that there were more MDSCs with Sca-1 positive reaction at 4 days, and the positive rate was 90. However, the number of Desmin positive MDSCs was relatively small. The results showed that both IGF-1 and IGF-1 could promote the proliferation of MDSCs in rats, and there was a synergistic effect. However, there was a significant difference between the two groups in promoting the proliferation of MDSCs in a dose-dependent manner in the 6.25ng / ml, 12.5ng / ml, 25ng / ml and 50ng / ml groups. The mechanism of action is still unclear.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329.1

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本文編號(hào)：1986145