本文選題：糖尿病 + 游離脂肪酸　； 參考：《山西醫(yī)科大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的：為研究脂毒性對大血管的損傷作用，，我們利用游離脂肪酸（FreeFattyAcids,FFAs）干預大鼠主動脈內(nèi)皮細胞（RatAortaEndothelialCell，RAEC），探討游離脂肪酸對大鼠主動脈內(nèi)皮細胞增殖與凋亡的影響及作用機制。 方法：原代培養(yǎng)大鼠主動脈內(nèi)皮細胞（RACE），采用不同濃度的葡萄糖（5.5mmol/L,30mmol/L）及棕櫚酸（200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L）單獨或聯(lián)合作用于培養(yǎng)成功的RAEC24h、48h、72h，設(shè)立正常對照組和d-BSA對照組。①倒置顯微鏡下形態(tài)學觀察；②采用細胞計數(shù)法繪制細胞X棾で擼虎勖庖咦櫓舊椒諂は赴�；④应用MTT比色法檢測不同環(huán)境下FFAs對RAEC增殖的影響；⑤免疫細胞化學法檢測處理前后RAEC中白細胞介素-8(IL-8),B細胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(B-celllymphoma2,bcl-2)，Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2AssaciatedXprotein,bax)表達水平。 結(jié)果： ①RAEC形態(tài)學觀察原代細胞在培養(yǎng)5-7天后，在主動脈貼壁附近可見少量游出的內(nèi)皮細胞；培養(yǎng)到12-13天，可見遷移出的細胞呈片生長，70%—80%單層融合，分布密度不均。培養(yǎng)出的內(nèi)皮細胞呈梭形、多角形，邊界清晰，胞漿豐富，核清晰，鋪滿后，細胞排列緊密，可見典型的“鋪路石”狀排列的單層細胞，并有接觸抑制現(xiàn)象。培養(yǎng)至7-8代后，細胞變瘦小，分泌物增多，可見細胞分化，成老化狀態(tài)。 ②細胞生長曲線大鼠主動脈內(nèi)皮細胞在傳代接種2h后開始貼壁，24h后90%細胞貼壁生長，24h-48h間細胞量有所減少，48h后可見新長出的細胞為單層、互不重疊，傳代細胞增殖速率較原代細胞增長稍快，第4-7天為對數(shù)生長期，第8-9天為平臺期。細胞生長曲線呈“S”型。 ③內(nèi)皮細胞的鑒定倒置顯微鏡下可見細胞呈典型的“鋪路石”狀單層排列貼壁生長，CD31相關(guān)抗原鑒定示：細胞呈圓形、梭形或多邊形，細胞胞漿內(nèi)可見棕黃色顆粒，而對照組內(nèi)未見著色，證實培養(yǎng)的細胞為大鼠主動脈內(nèi)皮細胞。 ④MTT檢測RAEC增殖不同劑量的棕櫚酸、葡萄糖及聯(lián)合培養(yǎng)組處理內(nèi)皮細胞24h、48h、72h后，與正常培養(yǎng)液組及d-BSA對照組相比差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），其中24h低劑量PA組與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）；相同濃度時，24h與72h組內(nèi)比較，高糖組、高、中、低劑量棕櫚酸組差異顯著（P0.01），聯(lián)合培養(yǎng)組不同時間段差異均顯著（P0.01）；高糖組、中、高劑量棕櫚酸組48h與72h組內(nèi)比較，24h與48h組內(nèi)比較差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），低劑量組24h與48h，48h與72h組內(nèi)比較差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。正常培養(yǎng)液組與d-BSA組相比無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 ⑤免疫組化法檢測結(jié)果正常對照組、d-BSA對照組培養(yǎng)內(nèi)皮細胞48h后，IL-8、BAX幾乎不表達或弱表達，兩對照組之間無統(tǒng)計學差異（P0.05）。不同濃度FFAs、高糖及聯(lián)合培養(yǎng)組處理細胞后，細胞IL-8表達明顯增高，且具有劑量依賴關(guān)系，與對照組相比，差異均具有統(tǒng)計學意義（P0.05）；細胞bcl-2表達隨濃度的增高表達逐漸減弱，與正常對照組及d-BSA對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；而細胞BAX表達則隨濃度的增加表達亦增強，與正常對照組及d-BSA組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。Bcl-2/bax比值隨葡萄糖及棕櫚酸濃度增高逐漸減低，聯(lián)合培養(yǎng)組為甚。 結(jié)論：體外培養(yǎng)并獲得7代內(nèi)皮細胞，形態(tài)學觀察及CD31相關(guān)抗原鑒定證實本實驗成功的培養(yǎng)原代及傳代生長的內(nèi)皮細胞；本培養(yǎng)方法操作簡便，周期較短，價格低廉，內(nèi)皮細胞純度較高，適宜實驗所需。高濃度FFAs及高糖具有抑制內(nèi)皮細胞生長，促進其凋亡的作用，并且具有時間濃度依賴性。這種作用機制可能是通過葡萄糖及棕櫚酸酯參與PI3K/AKT等途徑激活氧化應激誘導細胞凋亡。同時炎性因子IL-8表達增加，參與并共同促進主動脈內(nèi)皮細胞凋亡的發(fā)生。
[Abstract]:Objective: To study the effect of lipid toxicity on large blood vessels, we used FreeFattyAcids (FFAs) to intervene in rat aortic endothelial cells (RatAortaEndothelialCell, RAEC) and explore the effect and mechanism of free fatty acid on the proliferation and apoptosis of rat aortic endothelial cells.
Methods: primary cultured rat aortic endothelial cells (RACE) were cultured with different concentrations of glucose (5.5mmol/L, 30mmol/L) and palmitic acid (200 mu mol/L, 400 mu mol/L, 600 micron mol/L) individually or jointly on the successful culture of RAEC24h, 48h, 72h, set up normal control group and d-BSA control group. The effect of FFAs on the proliferation of RAEC in different environments was detected by the method of TT colorimetric assay in different environments; (5) the FFAs, IL-8, B cell lymphoma / leukemia -2 protein (B-celllymphoma2, bcl-2), Bcl-2 related protein SaciatedXprotein, Bax) expression level.
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本文編號：1979753