本文選題：Apo-E + 胸導(dǎo)管��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：肝臟是人體內(nèi)的重要器官，在物質(zhì)代謝尤其是脂肪代謝、生物轉(zhuǎn)化上起著重要的作用。載脂蛋白E(apolipoprotein E，Apo-E)是在1973年由Shore等，首先在正常人的極低密度脂蛋白中發(fā)現(xiàn)的，它由肝細(xì)胞合成，是乳糜微粒(CM)、極低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)的組成部分,也是極低密度脂蛋白受體的重要配體；它還參與脂蛋白的轉(zhuǎn)化與代謝過程，其基因可以調(diào)節(jié)許多生物學(xué)功能。眾所周知，淋巴管道是一種單向引流管道，主要從各器官、組織回收淋巴液、脂肪和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，再以淋巴的形式注入血液。肝臟產(chǎn)生的大量淋巴，大都經(jīng)過胸導(dǎo)管回流。了解Apo-E，對脂蛋白的轉(zhuǎn)化與代謝，具有重要的生理和病理意義。本實驗擬通過對正常飲食SD大鼠和高脂飲食喂養(yǎng)SD大鼠，結(jié)扎胸導(dǎo)管動物模型的肝組織，其Apo-E免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞形態(tài)學(xué)對比觀察，為探討Apo-E的轉(zhuǎn)運(yùn)，以及高脂喂養(yǎng)、實驗性淋巴瘀滯，分別對肝組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，提供形態(tài)學(xué)研究證據(jù)。 方法： 1、實驗動物與取材 選用40只1月齡健康SD大鼠，體重約100g，雌雄不拘，身長約12cm（鼻尖至尾根），由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。隨機(jī)分為兩組：A組，正常飲食組（20只）；B組，高脂飲食組（20只）。喂養(yǎng)10周后，將A組隨機(jī)分為A1組，即假手術(shù)組（10只）；A2組，手術(shù)組（10只）；B組隨機(jī)分為B1組，假手術(shù)組（10只）；B2組，手術(shù)組（10只）。造模成功后繼續(xù)分別喂養(yǎng)6個月后取材，對肝組織進(jìn)行光鏡、電鏡觀察。 2、光鏡樣品制備及觀察 石蠟包埋的肝組織切片，行常規(guī)的HE染色和光鏡觀察；從而顯示肝組織微細(xì)結(jié)構(gòu)、血管淋巴系統(tǒng)的分布特點(diǎn)。 3、免疫組織化學(xué)染色及光鏡觀察 A組和B組SD大鼠的肝組織進(jìn)行石蠟包埋切片，行Apo-E免疫組化染色，光鏡觀察Apo-E及受體免疫組化結(jié)果，在肝組織細(xì)胞上，免疫反應(yīng)表達(dá)陽性。 4、掃描和透射電鏡的樣品制備及觀察 肝組織標(biāo)本行常規(guī)掃描和透射電鏡樣品的制備和觀察；以揭示SD大鼠的肝組織超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，以及實驗性高脂喂養(yǎng)和淋巴淤滯，分別對肝組織和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)帶來的影響。 結(jié)果： 1、實驗手術(shù)中肉眼觀察 因為術(shù)前給予動物灌入食用油，經(jīng)腸道吸收，使得腸系膜淋巴管、腸干、乳糜池及胸導(dǎo)管等，因吸收和運(yùn)送乳糜物質(zhì)而呈乳白色，術(shù)中易于辨認(rèn)。于腹腔膈腳下準(zhǔn)確結(jié)扎胸導(dǎo)管后，結(jié)扎部位以下淋巴管充盈變粗。 實驗中肉眼可見，A1組肝臟呈暗紅色，并且有光澤，被膜光滑，邊緣圓潤；A2組、B1組和B2組肝臟體積增大，邊緣變鈍，被膜緊張，表面無光澤，有油膩感，甚至可見脂肪組織包裹。 2、HE染色組織切片光鏡觀察 在假手術(shù)組（A1），其肝組織結(jié)構(gòu)完整，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，六邊形肝小葉中央，可見一中央靜脈；肝細(xì)胞索以中央靜脈為中心，向周圍呈放射狀排列。在相鄰肝小葉之間的匯管區(qū)，可見三種管道：小葉間動脈、小葉間靜脈、小葉間膽管相伴存在。在手術(shù)組（A2）的肝組織中，脂肪細(xì)胞數(shù)目增多，所占體積變大，呈彌漫性脂肪變性；肝細(xì)胞腫脹增大，肝血竇周圍間隙變窄；匯管區(qū)出現(xiàn)明顯的炎性細(xì)胞侵潤，以淋巴細(xì)胞為主。 在假手術(shù)組（B1），肝組織中可見脂肪細(xì)胞浸潤；部分肝細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)大小不等的球形空泡，胞質(zhì)基質(zhì)疏松，呈局限性脂肪變性。肝細(xì)胞膜緊張，顏色變淡。在手術(shù)組（Ｂ2），肝組織中空泡樣的脂肪細(xì)胞數(shù)目增多，體積變大；肝細(xì)胞腫大變圓，胞核被推擠到細(xì)胞一側(cè)；少量肝細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核固縮甚至壞死現(xiàn)象，肝小葉呈現(xiàn)片狀壞死；匯管區(qū)結(jié)締組織內(nèi)，出現(xiàn)以淋巴細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤。肝組織發(fā)生中、重度脂肪變性；繼而肝組織結(jié)構(gòu)變得不完整，肝小葉的結(jié)構(gòu)出現(xiàn)異常，甚至呈現(xiàn)灶狀壞死。 3、免疫組織化學(xué)染色光鏡觀察 在假手術(shù)組（A1），其肝組織可見均勻的載脂蛋白E免疫反應(yīng)陽性結(jié)果，呈現(xiàn)棕褐色顆粒物質(zhì)沉積。在手術(shù)組（A2），肝組織可見增強(qiáng)的載脂蛋白E免疫反應(yīng)陽性結(jié)果，棕褐色顆粒沉積增多，且有統(tǒng)計學(xué)意義。 在假手術(shù)組（B1），其肝組織可見與假手術(shù)組（A1）類似的，均勻的Apo-E免疫反應(yīng)陽性結(jié)果，呈現(xiàn)棕褐色顆粒物質(zhì)沉積。手術(shù)組（Ｂ2）可見與手術(shù)組（A2）相似的載脂蛋白E免疫反應(yīng)陽性表達(dá)增強(qiáng)，棕褐色顆粒物質(zhì)沉積增多，且有統(tǒng)計學(xué)意義。 4、超薄組織切片透射電鏡觀察 在假手術(shù)組（A1），其肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)清晰，胞核圓且居中，可見多個核仁位于核的中央?yún)^(qū)；肝細(xì)胞的胞漿內(nèi)，可見大量線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和溶酶體等細(xì)胞器。未見炎性細(xì)胞浸潤和纖維增生。在手術(shù)組（A2），其肝細(xì)胞核的核膜增厚，核內(nèi)染色質(zhì)聚集，胞質(zhì)空曠、電子密度降低，并出現(xiàn)脂肪變表現(xiàn)。在肝血竇的竇周隙內(nèi)和肝細(xì)胞之間，可見明顯的脂類物質(zhì)的沉積，，纖維結(jié)締組織增多。易見肝細(xì)胞體積縮小，胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器減少；胞核固縮，體積縮小，電子密度明顯增強(qiáng)。 在假手術(shù)組（B1），肝細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)聚集，基質(zhì)分布不均，胞漿內(nèi)細(xì)胞器減少、基質(zhì)增多，出現(xiàn)明顯脂質(zhì)沉積。肝細(xì)胞之間可見脂質(zhì)物質(zhì)的沉積和結(jié)締組織纖維的增多。在手術(shù)組（Ｂ2），肝細(xì)胞的核膜不連續(xù)，核膜孔增大。在肝血竇的竇周隙內(nèi)和肝細(xì)胞之間，可見大量脂質(zhì)沉積，纖維結(jié)締組織明顯增多。易見胞核固縮、細(xì)胞凋亡，肝細(xì)胞索排列紊亂，毛細(xì)膽管擴(kuò)張，膽汁淤積。在部分細(xì)胞內(nèi)，可見巨大的線粒體。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，部分出現(xiàn)脫顆�，F(xiàn)象，胞漿內(nèi)可見脂滴。肝細(xì)胞之間和匯管區(qū)內(nèi)，也可見大量結(jié)締組織纖維增生。 5、掃描電鏡觀察 掃描電鏡觀察顯示，在正常大鼠肝臟表面，覆蓋一層由扁平上皮細(xì)胞構(gòu)成的腹膜；在扁平上皮細(xì)胞表面，尤其是上皮細(xì)胞的邊緣部位，存在大量的板狀和指狀微絨毛，上皮細(xì)胞含核的部位明顯突出、隆起。在肥胖或胸導(dǎo)管結(jié)扎大鼠，其肝被膜上皮細(xì)胞表面的微絨毛結(jié)構(gòu)明顯減少。 結(jié)論： 1、胸導(dǎo)管為肝臟淋巴回流的主要通道；于腹部膈腳下結(jié)扎胸導(dǎo)管，可成功建立肝淋巴瘀滯的實驗動物模型。 2、長期高脂飲食可誘發(fā)大鼠肥胖，引起肝組織內(nèi)脂質(zhì)沉積，影響脂類物質(zhì)代謝，甚至造成肝功能損害。 3、實驗性肝淋巴瘀滯可影響脂類物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝，誘發(fā)肝組織內(nèi)脂肪堆積，肝細(xì)胞脂肪樣變，Apo-E免疫陽性反應(yīng)表達(dá)增強(qiáng)；推測胸導(dǎo)管是轉(zhuǎn)運(yùn)Apo-E的重要途徑。
[Abstract]:Objective: the liver is an important organ in the human body, which plays an important role in material metabolism, especially in fat metabolism and biotransformation. Apolipoprotein E (Apo-E) is found in the normal human very low density lipoprotein (Shore) in 1973. It is synthesized by hepatocytes, CM, and extremely low density lipoprotein (V) (V). LDL) and the components of the high density lipoprotein (HDL) are also important ligands for the very low density lipoprotein receptor; it is also involved in the transformation and metabolism of lipoprotein, and its genes can regulate many biological functions. It is known that lymphatic pipes are a one-way drainage pipeline that reclaims lymph, fat, and protein mainly from organs and tissues. The large number of molecules are injected into the blood in the form of lymph. Most of the lymph nodes produced by the liver are reflued through the thoracic duct. To understand Apo-E, it is of important physiological and pathological significance to the transformation and metabolism of lipoprotein. This experiment is to tie the liver tissue of the animal model of the thoracic duct by feeding the normal diet SD rats and the high fat diet of SD rats. The morphological contrast observation of Apo-E immunoreactive cells was used to investigate the transport of Apo-E, and the effect of high fat feeding and experimental lymphatic stagnation on the morphological structure of liver tissue, and the morphological evidence was provided.
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本文編號：1977184